FISH检测
FISH 检测（Fluorescence In Situ Hybridization，荧光原位杂交）是一种分子细胞遗传学技术，利用荧光标记的特异性 DNA 探针与细胞核内目标 DNA 序列进行互补配对，从而在显微镜下直观定位基因。在临床肿瘤学中，FISH 是检测染色体易位、基因扩增及缺失的金标准。对于 滑膜肉瘤，FISH 通过检测 SS18 (SYT) 基因的断裂与重排（Break-apart），能以极高的特异度识别 $t(X;18)$ 易位，是患者准入 TCR-T 细胞免疫治疗 的核心筛选手段。
技术机制：原位荧光显像
FISH 技术结合了分子生物学的精确性和细胞遗传学的直观性，其核心步骤通过“变性-杂交”实现目标基因的可视化。
- 探针设计： 针对目标区域（如 SS18 基因座）设计红、绿荧光标记的 DNA 片段。
- 杂交过程： 样本 DNA 与探针在高温下变性为单链，随后在适宜温度下退火杂交，形成荧光标记的双链结构。
- 信号判读： 在荧光显微镜下，若红绿信号紧靠或重叠（呈黄色），为阴性；若红绿信号分离（Break-apart），则判定为存在易位重排。
临床景观：检测方法对比
| 检测手段 | 优势 | 在滑膜肉瘤诊断中的角色 |
|---|---|---|
| FISH (SS18) | 原位观察。不受样本异质性干扰，不依赖融合伴侣。 | 金标准。用于确诊 SS18 重排，特异度接近 100%。 |
| RT-PCR | 高灵敏度。可区分 SSX1 或 SSX2 亚型。 | 辅助。由于对 RNA 质量要求高且易受污染，常用于亚型鉴定。 |
| NGS (DNA/RNA) | 高通量。可同时检测多个融合及点突变。 | 进阶应用。在疑难病例鉴别诊断中具有重要价值。 |
应用策略：指导精准免疫治疗
- 患者入组筛选： 在针对 SS18-SSX 融合亚型的 TCR-T 临床试验 中，FISH 是确认靶点存在的强制性准入标准。
- 断裂探针 (Break-apart) 逻辑： 对于 SS18 基因，由于其融合伴侣（SSX1/2/4）不固定，临床首选断裂探针。红绿信号分离即判定为 SS18 受累，无论伴侣是谁。
- 鉴别诊断： 帮助将滑膜肉瘤与尤文肉瘤（EWSR1重排）、横纹肌肉瘤（PAX3/7重排）等形态学相似的“小圆蓝细胞肿瘤”彻底区分。
关键关联概念
- SS18 (SYT)： FISH 检测在滑膜肉瘤中的核心靶点基因。
- t(X;18)： FISH 探针旨在识别的遗传学易位事件。
- 断裂探针 (Break-apart Probe)： 肉瘤诊断中最常用的探针设计类型。
- 诊断金标准： FISH 在具有特征性易位的软组织肉瘤中的地位。
学术参考文献与权威点评
[1] Pinkel D, et al. (1986). Fluorescence in situ hybridization with human chromosome-specific libraries: Detection of trisomy 21 and translocations of chromosome 4. PNAS.
[学术点评]：FISH 技术的奠基性文献，首次证明了荧光标记探针在染色体异常检测中的可行性。
[2] Ladanyi M. (2001). The SYT-SSX translocation: a molecular signature of synovial sarcoma. Modern Pathology.
[学术点评]：权威病理学综述，明确了通过 FISH 检测 SS18 基因断裂作为滑膜肉瘤诊断“金标准”的地位。
[3] WHO Classification of Tumours Editorial Board. (2020). Soft Tissue and Bone Tumours (5th ed.). IARC Press.
[学术点评]：世卫组织病理标准。在 2024-2025 年的临床实践中，FISH 依然是确认肉瘤融合基因的首选验证方法。