二代 RAFi
二代 RAF 抑制剂（Second-generation RAF Inhibitors），也常被称为 Pan-RAF 抑制剂或II型RAF抑制剂，是一类旨在克服第一代药物（如维莫非尼、达拉非尼）局限性的新型小分子激酶抑制剂。与第一代药物仅能有效抑制 BRAF V600E 单体并容易诱导矛盾性激活不同，二代 RAF 抑制剂通过结合激酶的 DFG-out（非活性）构象或破坏二聚体界面，能够有效阻断 RAF 二聚体（BRAF/BRAF 或 BRAF/CRAF）的信号传导。这使得它们不仅对 BRAF 融合（如 KIAA1549-BRAF）和非典型突变（Class II/III）有效，还能避免在 RAS 突变背景下激活 ERK 通路，从而减少皮肤毒性并克服耐药。代表药物包括已获批的 托沃拉非尼 (Tovorafenib) 以及临床阶段的 贝尔瓦非尼 (Belvarafenib)。
设计原理：从“单体”到“二聚体”的跨越
二代 RAF 抑制剂的诞生是为了解决一代药物无法触及的生物学机制。
- 构象选择性 (Conformational Selection)：
第一代抑制剂（如维莫非尼）主要结合 DFG-in（活性）构象的 αC-螺旋。而二代抑制剂通常结合 DFG-out（非活性）构象。这种结合模式占据了 ATP 口袋，并在空间上破坏了 RAF 二聚体形成所需的别构网络，或者虽然允许二聚体形成，但能同时抑制二聚体中的两个单体。 - 解决矛盾性激活 (Paradox Breakers)：
第一代药物结合一个 BRAF 分子后，会诱导其与 CRAF 结合，导致未被药物结合的 CRAF 发生反式激活（Trans-activation），引发 MAPK 信号暴涨。二代抑制剂（Pan-RAF）能均等地抑制 BRAF 和 CRAF，阻断了这种反式激活回路，因此在 RAS 突变或 BRAF 野生型细胞中不会诱导肿瘤生长。
I型与II型 RAF 抑制剂的作用机制对比
临床应用：填补一代药物的空白
重塑治疗格局
二代 RAF 抑制剂极大地扩展了 RAF 靶向治疗的受益人群，不再局限于 V600E 突变。
关键适应症突破：
1. BRAF 融合阳性肿瘤： 对于携带 KIAA1549-BRAF 的儿童低级别胶质瘤，一代药物是禁忌，而二代药物（如托沃拉非尼）已成为标准选择。
2. Class II/III 突变： 针对依赖二聚体激活的 K601E（Class II）或激酶失活但激活 CRAF 的 D594G（Class III）突变，二代药物显示出显著疗效。
3. NRAS 突变黑色素瘤： 既往无药可治，二代 RAF 抑制剂（Pan-RAF）可阻断 NRAS 下游的 CRAF 信号，显示出初步活性。
| 代表药物 | 开发代号 | 临床进展与特点 |
|---|---|---|
| 托沃拉非尼 (Tovorafenib) | DAY101 / TAK-580 | FDA获批。用于复发/难治性儿童低级别胶质瘤（BRAF 融合或突变）。具有良好的血脑屏障透过性。 |
| 贝尔瓦非尼 (Belvarafenib) | HM95573 | 强效 Pan-RAF 抑制剂。目前正与 考比替尼 (MEKi) 联用，针对 NRAS 突变黑色素瘤和耐药 BRAF 突变实体瘤进行临床试验。 |
| 纳波拉非尼 (Naporafenib) | LXH254 | II 型抑制剂。研究重点在于与 Trametinib 或 Ribociclib 联用，治疗 RAS/RAF 突变的实体瘤。 |
| 利非拉非尼 (Lifirafenib) | BGB-283 | 具有双重 RAF 和 EGFR 抑制活性的独特药物，针对 BRAF/KRAS 突变肿瘤开发。 |
学术参考文献与权威点评
[1] Yao Z, Torres NM, Tao A, et al. (2015). BRAF Mutants Evade ERK-Dependent Feedback by Different Mechanisms that Determine Their Sensitivity to Pharmacologic Inhibition. Cancer Cell. 2015;28(3):370-383.
[学术点评]：理论奠基。明确提出了 BRAF 突变的分类（Class I/II/III），并指出第二代（Pan-RAF）抑制剂是解决二聚体依赖性突变（Class II/III）的关键。
[2] Kilburn LB, et al. (2024). FDA Approval Summary: Tovorafenib for Relapsed or Refractory BRAF-altered Pediatric Low-Grade Glioma. Clinical Cancer Research. 2024 (Epub ahead of print).
[学术点评]：临床里程碑。基于 FIREFLY-1 试验的优异数据（针对 BRAF 融合），FDA 批准了首个二代 RAF 抑制剂 Tovorafenib，验证了该类药物在临床上的巨大价值。
[3] Kim TM, Kim SW, Lee KW, et al. (2021). Phase 1 Study of Belvarafenib, a Novel Pan-RAF Inhibitor, in Patients with BRAF-mutant or RAS-mutant Solid Tumors. The Lancet Oncology. 2021;22(10):1484-1495.
[学术点评]：泛RAF潜力。展示了 Belvarafenib 在 NRAS 突变黑色素瘤和 BRAF 突变难治性实体瘤中的安全性与疗效，突显了 Pan-RAF 抑制剂广谱抗癌的潜力。