ELISA

ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，酶联免疫吸附测定）是一种利用抗原-抗体特异性结合反应，并结合酶的高效催化放大作用来检测微量物质的免疫分析技术。该技术的核心在于将抗原或抗体吸附在固相载体（通常是聚苯乙烯微孔板）表面，利用酶标记的抗体与目标物结合，最后通过底物显色来定性或定量分析。凭借其高灵敏度、高特异性和高通量（96孔板）的优势，ELISA 已成为生物医学研究和临床诊断（如 HIV 筛查、激素检测）中的“金标准”。

ELISA

Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (点击展开)

外观：显色深浅代表浓度高低

技术参数
检测对象	蛋白, 抗体, 激素, 细胞因子
信号输出	光密度值 (OD 值)
灵敏度	pg/mL 至 ng/mL 级
常用酶	HRP (辣根过氧化物酶) AP (碱性磷酸酶)
常用底物	TMB (显蓝色→黄色)

原理与流程：固相上的“三明治”

ELISA 的精髓在于将液相中的免疫反应“固定”在固相载体表面，通过洗涤步骤去除未结合的成分。以最经典的双抗体夹心法为例：

• 包被 (Coating)： 将特异性捕获抗体吸附在 96 孔板底部。
• 封闭 (Blocking)： 用牛血清白蛋白 (BSA) 或脱脂奶粉填补空隙，防止非特异性吸附（背景噪音）。
• 加样 (Sample)： 加入待测样本，抗原被捕获抗体“抓住”。
• 检测 (Detection)： 加入酶标记的检测抗体，形成“抗体-抗原-抗体”的夹心结构。
• 显色 (Readout)： 加入底物（如 TMB），酶催化底物变色，颜色深浅与抗原浓度成正比。

四大核心类型对比

选择指南： 测大分子抗原首选夹心法；测血清抗体首选间接法；测小分子半抗原首选竞争法。

类型	原理结构	典型应用
直接法 (Direct)	抗原直接包被 + 酶标一抗	简单的抗原定性，特异性稍差。
间接法 (Indirect)	抗原包被 + 一抗 + 酶标二抗	HIV 抗体筛查、丙肝抗体检测。
夹心法 (Sandwich)	捕获抗体 + 抗原 + 检测抗体	灵敏度最高。检测细胞因子、肿瘤标志物。
竞争法 (Competitive)	标记抗原与样本抗原竞争位点	小分子药物、激素（如皮质醇）检测。

常见问题：Hook 效应

假阴性的陷阱

在双抗体夹心法中，如果待测标本中抗原浓度过高，过量的抗原会分别结合捕获抗体和检测抗体，阻止“三明治”结构的形成，导致显色反而变浅，出现假阴性结果。这被称为“钩状效应”（Hook Effect）。
对策： 对高浓度样本进行梯度稀释后重测。

       学术参考文献 [Academic Review]
       

[1] Engvall E, Perlmann P. (1971). Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Quantitative assay of immunoglobulin G. Immunochemistry.
[点评]：ELISA 技术的奠基之作，这两位瑞典科学家因此发明彻底改变了临床诊断学。

[2] Crowther JR. (2000). The ELISA Guidebook. Methods in Molecular Biology.
[点评]：这一领域的百科全书，详细阐述了不同类型 ELISA 的构建、优化及排错指南。

[3] Lequin RM. (2005). Enzyme immunoassay (EIA)/enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Clinical Chemistry.
[点评]：回顾了 ELISA 技术的历史演变及其在现代检验医学中的核心地位。

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