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2014-03-02T16:37:16Z

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[[组织化学]]（histochemistry）和[[细胞化学]]（cytochemistry）技术是通过[[化学]]或[[物理]]反应原理显示[[组织切片]]细胞内某种化学成分，进行定位、定量及其与功能相关的研究。如糖类、[[脂类]]、酶、[[核酸]]等与[[试剂]]发生化学物理反应，形成有色终末产物，在光镜下观察，有的可在电镜下观察。

1．糖类显示[[多糖]]和[[蛋白]]多糖的常用方法是[[过碘酸]]－雪夫反应（periodic acid Schiff reaction,PAS反应）。基本原理是过碘酸的[[氧化作用]]先使糖分子的乙二醇基变为乙二醛基，后者继而与Schiff试剂（无色亚硫酸品红[[复合物]]）结合，形成紫红色反应产物（图1－3）。颜色反应的深浅取决于组织内多糖的乙二醇[[分子]]的多寡。

{{图片|gunka4u3.jpg|PAS反应原理示意图 }}

图1－3 PAS反应原理示意图

2．脂类脂类物质包括脂肪和类脂。[[标本]]用[[甲醛]]固定，[[冷冻]]切片，脂类保存较好。多用苏丹染料、油红O、[[尼罗蓝]]等溶于脂类的染料[[染色]]，使[[脂质]]呈色。也可用[[四氧化锇]]（OSO4）染色，脂肪酸或[[胆碱]]可使OSO4还原为OSO2而呈黑色。

3．酶细胞内的酶种类甚多，有[[氧化还原酶]]、[[水解酶]]、[[合成酶]]、[[转移酶]]等几类，目前已有100多种酶组织化学染色法。酶组化反应的基本原理是利用酶对其相应[[底物]]的水解、氧化等作用，然后再使底物的反应产物与某种捕获剂发生反应，形成沉淀或有色的最终产物，借此检测该酶在组织切片或细胞内的分布及活性强弱。如[[细胞]]的[[磷酸酶]]是一种重要的水解酶，[[碱性磷酸酶]]（[[ALP]]）和[[酸性磷酸酶]]（[[ACP]]）在合适的pH条件下可水解[[有机磷]]酸脂。[[小肠]][[上皮细胞]]表面的[[纹状缘]]和肾[[近曲小管]]表面的刷状缘处，[[微绒毛]]含有丰富的ALP，与物质的吸收和转运功能相关；许多细胞的[[溶酶体]]内则含大量ACP，参与细胞内物质[[代谢]]。这两种酶均可以β-[[甘油磷酸钠]]为底物，底物被水解产生[[磷酸]]根，再以[[Ca]]2+、Co2+(显示ALP)或Pb2+（显示ACP）捕获磷酸根，最后用硫化铵处理，即形成硫化钴或硫化铅黑色最终产物，出现在组织切片中该酶存在的部位。因此，酶组化染色不是酶本身的直接显色，而是酶作用底物的化学反应产物显色的。

4．核酸显示[[DNA]]的传统方法是Feulgen反应，切片先用[[稀盐酸]]处理，使DNA分子中脱氧核糖与嘌呤之间的连接键打开，形成醛基，再与Schiff 试剂作用，原理同PAS反应，使[[细胞核]]DNA显紫红色。还可用[[甲基绿]]－焦宁染色法同时显示DNA和[[RNA]]，这两种染料都是碱性，甲基绿使细胞核内的DNA呈蓝绿色，焦宁使[[细胞质]]和[[核仁内]]的RNA呈红色。

{{图片|gunka7i4.jpg| [[免疫细胞化学]]术示意图}}

图1－4 免疫细胞化学术示意图

{{图片|gunkaacn.jpg|人[[呼吸道]]分离上皮细胞[[粘蛋白]][[免疫荧光]]像 }}

图1－5 人呼吸道分离上皮细胞粘蛋白免疫荧光像

（美国戴维斯加州大学吴忍教授供图）
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组织学/组织化学和细胞化学术 - 版本历史

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