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2021-07-21T19:12:19Z

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1、透射电镜术透射电镜（transmission electron microscope,TEM）是以电子束穿透样品（组织的[[超薄切片]]），经聚合放大后，显像于荧光屏上进行观察和摄片的。电镜的放大倍数的分辨率比光镜大得多，放大倍数为几万至几十万倍，分辨率可达0.2nm。[[标本]]制备较光镜的更严格，新鲜组织切成小块（lmm<sup>3</sup>），用[[戊二醛]]，[[多聚甲醛]]、[[四氧化锇]]等固定，树脂包埋，以[[超薄切片机]]切成厚50～80nm的超薄切片，经[[醋酸]]铀和[[柠檬酸]]铅等重金属[[电子染色]]后，置于电镜下观察，标本在荧光屏上呈黑白反差的结构影像。被重金属浸染呈黑色的结构，称电子密度高（electron-dense）；反之，浅染的部分称电子密度低（electron-lucent）,这种[[染色]]称正染色（positive staining）。若被染结构着色浅淡，而其周围部分染成黑,是称为[[负染]]色（negative stainning）。透射电镜的电子枪加速电压50～100kV，电子束穿透力低，近年制成加速电压500kV以上的超高压电镜，电子束穿透力很强，可观察0.5～10μm厚的切片，可观察细胞内骨架等的立体[[超微结构]]。应用电镜观察[[细胞化学]]染色标本，称电镜细胞化学术（electron microscope cytochemistry）；电镜观察[[免疫细胞化学]]染色标本，称[[免疫]]电镜术（immunoelectron microscopy）；电镜与[[放射自显影]]结合的方法称电镜[[放射自显影术]]（electron microscopeautoradiography）。

2、扫描电镜术扫描电镜（scanning electron microscope,SEM）是用于观察组织表面的立体结构的。组织块经固定后，置于[[真空]]镀膜仪内于燥，在标本表面先后喷镀一层碳膜和合金膜，即可置于镜下观察。扫描电镜的景深长，样品表面的金属膜可提高其导电性和图像反差，在荧光屏上扫描[[成像]]，呈现富有立体感的表面图像，如[[细胞表面]]的突起、[[微绒毛]]、[[纤毛]]及[[细胞]]的分泌与吞噬行为等（图1－13）。

{{图片|gunkbihe.jpg| [[大鼠]]分离肝[[巨噬细胞]]粘着吞噬羊[[红细胞]]扫描电镜像}}

图1－13大鼠分离肝巨噬细胞粘着吞噬羊红细胞扫描电镜像

M肝巨噬细胞，R羊红细胞

{{图片|gunkbrb0.jpg| [[冷冻蚀刻]]标本制备示意图}}

图1－14 冷冻蚀刻标本制备示意图

{{图片|gunkblbf.jpg| 细胞[[单位膜]]从中间层劈开示意图 }}

图1－15 细胞单位膜从中间层劈开示意图

3、冷冻蚀刻复型术和[[冷冻]]割断术

冷冻蚀刻复型术（tfeeze etch replica）：是在透射电镜下观察组织或细胞断裂面的金属复制膜，显示细胞微细结构的立体影像。组织块先经[[甘油]][[生理盐水]]处理（防止形成冰晶）后投入液氮快速冷冻，在[[低温]]下用钢刀将样品劈开，形成凹凸不平的断裂面：－100℃真空下使断裂面的冰晶升华，暴露不平整表面；在断裂面上先后喷镀一层合金膜和碳膜，用次氯酸等组织腐蚀掉；将反差的凸凹不平的金属复型膜置于镜下观察（图1－14）。此项技术尤适用研究生物膜的内部结构，如从单位膜的[[脂质]][[分子]]疏水端劈开（图1－15），经蚀刻镀膜，镜下可见[[质膜]]断裂面复型膜结构状态（图1－16），其凹凸影像恰与实物相反。

{{图片|gunkbodz.jpg|小[[鼠肾]][[近曲小管]]微绒毛冷冻蚀刻复型电镜像 }}

图1-16小鼠肾近曲小管微绒毛冷冻蚀刻复型电镜像 ×38300

MV微绒毛 E E面，P P面（[[白求恩]]医科大学尹昕、朱秀雄教授供图）

冷冻割断术（freeze cracking）：是将固定组织包埋在树脂内，低温下割断，断面喷镀合金，在扫描电镜下观察断面的立体[[构型]]。该技术适于研究组织内部微细结构的相互关系，如[[肝细胞]]与[[肝血窦]]和[[胆小管]]的关系，[[肾小体]]的肾小囊与[[血管球]]的关系等（图1－17）。

{{图片|gunkbfgq.jpg|大鼠肾冷冻割断扫描电镜示肾小体 }}

图1－17 大鼠肾冷冻割断扫描电镜示肾小体

R肾小囊外表面，G血管球，T[[肾小管]]

（白求恩医科大学尹昕、朱秀雄教授供图）

4、电镜X－[[射线]]显微分析术X－射线显微分析术（X-ray microanalysis）是研究细胞和组织内元素的种类、分布和含量的新技术。它是利用高速电子束轰击电镜内生物标本的微小区域，使该区所含的元素发射了一定波长的X－射线，通过检测器对X－射线进行[[波谱]]或能谱分析，即可测定微区内元素的性质、含量和分布。如测定细胞内[[Na]]、K、[[Ca]]、Fe、P、Cl等及某些[[微量元素]]的含量和分布变化，探讨各种元素与细胞生理和[[病理]]的关系。
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