119.187.88.238：以“{{Hierarchy header}} 应用一般光学显微镜（简称光镜）观察组织切片是组织学研究的最基本方法。取动物或人体的新鲜组...”为内容创建页面

2014-03-02T16:40:37Z

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应用一般[[光学显微镜]]（简称光镜）观察[[组织切片]]是[[组织学]]研究的最基本方法。取动物或人体的新鲜组织块，先用固定剂（fixative）固定（fixation），使组织中的[[蛋白质]]迅速凝固，防止[[细胞]][[自溶]]和组织腐败。常用的固定剂如酒精、[[甲醛]]、[[醋酸]]、[[苦味酸]]、[[四氧化锇]]等，一般常将几种固定剂配制成混合固定液，以抵消或减弱单种固定剂对组织的收缩或[[膨胀]]等缺点，达到更好固定效果。固定后的组织块（约3～5mm3大小）用[[石蜡]]、[[火棉胶]]或树脂等包埋（embedding）成硬块，以[[切片机]]（microtome）切成5～10μm厚的组织切片（tissue section），切片贴在[[载玻片]]上经脱蜡等步骤后进行[[染色]]。组织块也可立即投入液氮（－196℃）内快速冻结，用恒冷箱切片机（cryostat）制成[[冷冻]]切片（frozen section），这种方法制片迅速，细胞内[[酶活性]]保存较好，常用于酶[[组织化学]]染色。[[血细胞]]和分离培养的细胞可直接涂在玻片上，制成[[涂片]]（smear）。[[疏松结缔组织]]和[[肠系膜]]等软组织可撕成薄片铺在玻片上（铺片），牙和骨等坚硬组织可磨成薄片（磨片）。组织切片等[[标本]]经染色、透明后，以[[封固]]剂和盖片封固，即可长期保存，镜下观察。

{{图片|gunk9qiy.jpg| 坚牢绿（酸性染料）与[[亚甲蓝]]（碱性染料）的[[化学]]结构及其染色反应示意}}

图1－1　坚牢绿（酸性染料）与亚甲蓝（碱性染料）的化学结构及其染色反应示意

染色（staining）是用染料使组织切片着色，便于镜下观察。天然和人工合成的染料甚多,它们都是含[[发色团]]的有机化合物，当染料具有[[助色团]]成为盐类物质，即可溶解于水并具电荷，与组织有[[亲合力]]，使组织着色。含氨基（－NH2）、[[二甲氨基]]〔－N（CH3）2〕等碱性助色团的染料，称碱性染料（basic dye），它的[[盐溶]]液具阳电荷；含羧基（－COOH）、[[羟基]]（－OH）或磺基（－SO3H）等酸性助色团的染料，称酸性染料（acid dye），它的溶液具阴电荷（图1－1）。组织的染色原理一般认为基于化学结合或[[物理]]吸附作用。细胞和组织的酸性物质或结构与碱性染料亲合力强者，称[[嗜碱性]]（basophilia）；而碱性物质或结构与酸性染料亲合力强者，称[[嗜酸性]]（acidophilia）；若与两种染料的亲合力均不强者，称中性(neutrophilia)。组织的基本成分是蛋白质，构成蛋白质的[[氨基酸]]常是即有含氨基的，也有含羧基的，是[[两性电解质]]。各种蛋白质的[[等电点]]因氨基酸成分的不同而异，其电荷性质又与溶液的pH值相关，根据研究目的选用合适的染色方法，调整好染液的pH值，即可取得良好染色效果。常用的酸性染料如[[伊红]]、坚牢绿、橙黄G等，碱性染料如[[苏木精]]、亚甲蓝、[[碱性品红]]等。组织学中最常用的是苏木精（hematoxylin）和伊红（eosin）染色法，简称HE染色法。苏木精使[[细胞核]]和[[胞质]]内的嗜碱性物质着蓝紫色，伊红使[[细胞质]][[基质]]和间质内的[[胶原纤维]]等着红色。

物理吸附作用的染色方法，如用苏丹染料显示[[脂肪组织]]，染料溶于脂肪内，使细胞内的脂滴显色。又如用[[硝酸银]]、氯化金等重金属盐显示细胞和组织的某些结构，则是使金属微粒附着在结构表面而呈棕黑色或棕黄色。银染法中有些组织结构可直接使硝酸银还原而显示，称此为亲银性（argentaffin）；有些结构无直接还原作用，需加入[[还原剂]]方能显色，则称为嗜银性（argyrophilia）。还有些组织成分如[[结缔组织]]和[[软骨基质]]中的糖氨[[多糖]]，当用[[甲苯胺蓝]]（toluidine blue）等碱性染料染色后呈紫红色，这种现象称为[[异染性]](metachromasia)，其原理可能是该染料在溶液中呈单体状态时显蓝色，当它与多阴离子的高分子物质耦合后，染料[[分子]]聚合成[[多聚体]]而显红色（图1－2）。还有些染色方法的原理至今还不清楚。

{{图片|gunk9n4q.jpg|异染性示意图 }}

图1－2 异染性示意图
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