https://www.yiliao.com/index.php?action=history&feed=atom&title=%E7%94%9F%E7%89%A9%E5%8C%96%E5%AD%A6%E4%B8%8E%E5%88%86%E5%AD%90%E7%94%9F%E7%89%A9%E5%AD%A6%2F%E7%9B%AE%E7%9A%84%E5%BA%8F%E5%88%97%E4%B8%8E%E8%BD%BD%E4%BD%93%E7%9A%84%E8%BF%9E%E6%8E%A5 2026-04-12T22:30:30Z 本wiki的该页面的版本历史 MediaWiki 1.35.1 https://www.yiliao.com/index.php?title=%E7%94%9F%E7%89%A9%E5%8C%96%E5%AD%A6%E4%B8%8E%E5%88%86%E5%AD%90%E7%94%9F%E7%89%A9%E5%AD%A6/%E7%9B%AE%E7%9A%84%E5%BA%8F%E5%88%97%E4%B8%8E%E8%BD%BD%E4%BD%93%E7%9A%84%E8%BF%9E%E6%8E%A5&diff=176282&oldid=prev 2014-02-06T05:26:30Z

<p>以“{{Hierarchy header}} 将目的<a href="/%E5%9F%BA%E5%9B%A0" title="基因">基因</a>或序列插入载体，主要靠<a href="/DNA" title="DNA">DNA</a><a href="/%E8%BF%9E%E6%8E%A5%E9%85%B6" title="连接酶">连接酶</a>和双链DNA粘末端<a href="/index.php?title=%E5%8D%95%E9%93%BE&amp;action=edit&amp;redlink=1" class="new" title="单链（页面不存在）">单链</a>序列互补结合的配合使用。有...”为内容创建页面</p> <p><b>新页面</b></p><div>{{Hierarchy header}}<br /> 将目的[[基因]]或序列插入载体，主要靠[[DNA]][[连接酶]]和双链DNA粘末端[[单链]]序列互补结合的配合使用。有以下主要的方式。<br /> <br /> == 一、[[粘性末端]]连接==<br /> <br /> 如果目的序列两端有与载体上相同的[[限制性核酸内切酶]][[位点]]，则同一[[限制酶切]]开产生的粘末端，在降低温度退火时，能重新互补结合，在DNA连接酶[[催化]]下，目的序列就与载体DNA链相连接（见图20-5）。<br /> <br /> {{图片|grarulon.jpg|同一限制酶切割DNA粘性末端的连接}}<br /> <br /> 图20-5　同一限制酶切割DNA粘性末端的连接<br /> <br /> 不同的[[限制性内切酶]]切，如果产生的DNA的粘末端相同，也同样可用此法连接，如识别6bp序列的BamHⅠ和识别4bp序列的Sau3aⅠ切割DNA后都产生5’突出粘性末端GATC，可以互补结合连接。<br /> <br /> 如果在连接的两个DNA片段没有能互补的粘性末端，可用末湍[[核苷酸]][[转移酶]]催化[[脱氨]][[单核苷酸]]添加DNA的3’末端，例如一般DNA3’端加上polyG，另一股DNA加上polyC，这样人工在DNA两端做出能互补的共核苷酸多聚物粘性末端，退炎后能结合连接（图20-6），这样方法称为同聚物加尾法。<br /> <br /> {{图片|grarupkx.jpg|同聚物加尾连[[拉法]]}}<br /> <br /> 图20-6 同聚物加尾连拉法<br /> <br /> 对平末端的DNA，也可先连上人工设计合成的脱氧[[寡核苷酸]]双链接头，使DNA末端产生新的限制[[内切酶]]位点，经内切酶割后，即可按粘性末端相连（图20-7）。<br /> <br /> {{图片|grarugv0.jpg|人工接头连接法}}<br /> <br /> 图20-7　人工接头连接法<br /> <br /> == 二、平末端连接==<br /> <br /> [[T4]]DNA连接酶也能催化限制性内切酶切割产生DNA平末端的连接。如果目的序列和载体上没有相同的限制性内切酶位点可供利用，用不同的限制性内切酶切割后的粘性末端不能互补结合，则可用适当的酶将DNA突出的末端削平或补齐成平末端，再用T4DNA连接酶连接，但平末端连接要比粘性末端连接的效率低得多。<br /> {{Hierarchy footer}}<br /> {{生物化学与分子生物学图书专题}}</div>

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