https://www.yiliao.com/index.php?action=history&feed=atom&title=%E7%94%9F%E7%89%A9%E5%8C%96%E5%AD%A6%E4%B8%8E%E5%88%86%E5%AD%90%E7%94%9F%E7%89%A9%E5%AD%A6%2F%E5%9F%BA%E5%9B%A0%E5%BA%8F%E5%88%97%E5%AF%BC%E5%85%A5%E7%BB%86%E8%83%9E 2026-04-26T21:57:37Z 本wiki的该页面的版本历史 MediaWiki 1.35.1 https://www.yiliao.com/index.php?title=%E7%94%9F%E7%89%A9%E5%8C%96%E5%AD%A6%E4%B8%8E%E5%88%86%E5%AD%90%E7%94%9F%E7%89%A9%E5%AD%A6/%E5%9F%BA%E5%9B%A0%E5%BA%8F%E5%88%97%E5%AF%BC%E5%85%A5%E7%BB%86%E8%83%9E&diff=176323&oldid=prev 2014-02-06T05:27:29Z

<p>以“{{Hierarchy header}} 目的<a href="/%E5%9F%BA%E5%9B%A0" title="基因">基因</a>序列与载体连接后，要导入<a href="/%E7%BB%86%E8%83%9E" title="细胞">细胞</a>中才能繁殖<a href="/%E6%89%A9%E5%A2%9E" title="扩增">扩增</a>，再经过筛选，才能获得<a href="/%E9%87%8D%E7%BB%84DNA" title="重组DNA">重组DNA</a>分子克...”为内容创建页面</p> <p><b>新页面</b></p><div>{{Hierarchy header}}<br /> 目的[[基因]]序列与载体连接后，要导入[[细胞]]中才能繁殖[[扩增]]，再经过筛选，才能获得[[重组DNA]][[分子克隆]]，不同的载体在不同的[[宿主]]细胞中繁殖，导入细胞的方法也不相同。<br /> <br /> == 一、转化==<br /> <br /> 由于外源[[DNA]]的进入而使[[细胞遗传]]性改变称为转化，早在1943年，Avery等就发现有毒[[肺炎双球菌]]的DNA与无毒肺炎双球菌共培养后产生有毒性的肺炎双球菌后代的转化现象。但DNA进入细胞的效率很低，在[[分子]][[生物学]]和[[基因工程]]工作中可采取一些方法处理细胞，经处理后的细胞就容易接受外界DNA，称为[[感受态]]细胞，再与外源DNA接触，就能提高转化效率。例如[[大肠杆菌]]经冰冷CaCl2的处理，就成为感受态[[细菌]]，当加入[[重组质粒]]并突然由4℃转入42℃作短时间处理，[[质粒]]DNA就能进入细菌；用高电压脉冲短暂作用于细菌也能显着提高转化效率，这称为[[电穿孔]]（electroporation）转化法。<br /> <br /> == 二、[[感染]]==<br /> <br /> [[噬菌体]]进入宿主细菌，[[病毒]]进入宿主细胞中繁殖就是感染（infection）。用经人工改造的噬菌体活病毒作载体，以其DNA与目的序列[[重组]]后，在体外用噬菌体或病毒的外壳[[蛋白]]将重组DNA包装成有活力的噬菌体或病毒，就能以感染的方式进入宿主细菌或细胞，使目的序列得以复制繁殖。感染的效率很高，但DNA包装成噬菌体或病毒的操作较麻烦。<br /> <br /> == 三、[[转染]]==<br /> <br /> 重组的噬菌体DNA也可象质粒DNA的方式进入宿主菌，即宿主菌先经过CaCl2，电穿孔等处理成感受态细菌再接受DNA，进入感受态细菌的噬菌体DNA可以同样复制和繁殖，这种方式称为转染（transfection）。M13噬菌体DNA导入大肠杆菌就常用转染的方法。重组DNA进入宿主细胞也常用转染方式。最经典的是1973年建立的[[磷酸钙]]法，其利用的基本现象是：DNA如以磷酸钙-DNA共沉淀物形式出现时，培养细胞摄取DNA的效率会显着提高。用电[[穿孔]]法处理培养的哺乳类细胞也能提高细胞摄取DNA能力，但所用外加电场的强度、电脉冲的长度等条件与处理细菌者都很不相同。近年来用人工[[脂质]]膜包裹DNA，形成的[[脂质体]]（Liposome）可以通过与[[细胞膜]]融合而将DNA导入细胞，方法简单而有效，现有商售的脂质体[[试剂]]，使用日益广泛。<br /> {{Hierarchy footer}}<br /> {{生物化学与分子生物学图书专题}}</div>

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