112.247.109.102：以“{{Hierarchy header}} 寄生虫标本的保存，除制成玻片标本永久保存外，还可用以下各种保存方法。一、原虫包囊和虫卵...”为内容创建页面

2014-01-26T16:15:05Z

以“{{Hierarchy header}} 寄生虫标本的保存，除制成玻片标本永久保存外，还可用以下各种保存方法。一、原虫包囊和虫卵...”为内容创建页面

新页面

{{Hierarchy header}}
[[寄生虫]][[标本]]的保存，除制成玻片标本永久保存外，还可用以下各种保存方法。

一、[[原虫]]包囊和虫卵的保存

汞碘醛液10ml与粪便1g混匀后密封在瓶内，可保存其中的原虫包囊及虫卵数月之久，也可在经浓集法处理的粪便沉渣中加等量或1倍量的10%[[甲醛]]液（加热至70℃），摇匀，用[[石蜡]]封固瓶口。

二、[[蠕虫]]成虫的保存

'''1.[[线虫]]'''　[[生理盐水]]洗净后用加热至70～80℃的70%[[酒精]]或巴氏液（甲醛3份，生理盐水97份固定，冷却后移至新的70%酒精或巴氏液中保存。小型线虫（如[[旋毛虫]]、[[蛲虫]]、[[钩虫]]等）宜用[[甘油]]酒精（70%酒精95ml，甘油5ml）加热固定，保存于80%酒精中；也可用[[冰醋酸]]固定约半小时后移入70%酒精或甘油酒精中保存。

'''2.[[吸虫]]'''　小型吸虫可置于小瓶中，加生理盐水，用力摇荡数分钟，倒去生理盐水，注入固定液。较大的吸虫应先放在[[薄荷脑]]酒精液（薄荷脑24g，95%酒精10ml）中，使虫体[[肌肉]]松弛，用[[载玻片]]压平后固定，或将洗净后的吸虫放在两片载玻片间用细线紧扎压平后固定。

固定一般用10%甲醛，24小时后移至5%甲醛中保存；或用70%酒精固定0.5～3小时，视虫体大小而定，再移至新的70%酒精中保存。

'''3.[[绦虫]]'''　大型绦虫（如猪、牛带绦虫）经清水洗涤数次后，在生理盐水（4℃）中经过数小时或过夜，虫体可完全伸展，此时以3%福尔马林固定，24小时后移至5%福尔马林中保存，必要时也可先用大玻璃板压平后固定。小型绦虫洗涤后可在3%福尔马林中固定3～5小时，用载玻片轻压，沿[[盖玻片]]边缘加5%甲醛固定数小时，最后保存在5%福尔马林溶液中。

三、昆虫的保存

'''1.[[干标本]]保存'''系保存[[有翅昆虫]]成虫。可用特制的昆虫针针插虫体。大型昆虫（蝇、虻等）用1～3号昆虫针，从虫体背面、[[中胸]]右侧直插（图21-9）。注意保持左侧完整，以便鉴定。小型昆虫（蚊、蛉、蚋、蠓等）可用00号短针自[[胸部]]腹面两中足基部之间插入，不可刺透胸背，再用另一[[长针]]从软木片另一端插下。最后各插一硬纸片，记录名称、采集地点与时间，并将之插于昆虫盒软木板上或玻璃管的软木塞上。昆虫盒内放入纸包的[[樟脑粉]]即可。如标本数量多（图21-9），可保存于塑料管（或玻璃管）中，管底放少量樟脑粉，再铺上[[棉花]]、滤纸各一层，昆虫标本放于滤纸上，用软棉纸包棉花，轻塞在昆虫标本上方，瓶口加软木塞，再以蜡封之。

{{图片|gleygk18.jpg|有翅昆虫针插法}}

图21－9　有翅昆虫针插法

'''2.湿标本保存'''用于保存有翅昆虫的卵和幼虫期及无翅昆虫和[[蜱螨]]类的发育各期。活标本先经加温的70%酒精（60～70℃）固定，一天后保存于5%甘油酒精（7%）中；也可用5%或10%福尔马林和Bless液固定保存。

所有保存标本须详细记录标本名称、[[宿主]]、采集地点、采集日期及采集者姓名。

[[樟脑]]混合剂配制：樟脑粉6份，[[氯仿]]1份，[[木馏油]]1份，[[石蜡油]]4份。先将樟脑粉1.5份与氯仿1份混合，随后加樟脑1.5份与木馏油1份，用玻璃棒混匀，最后加樟脑粉3份及石蜡油4份，再搅匀备用。此混合剂易燃，宜置于严密而不透气的瓶内储藏。

常用固定液配制：

⑴酒精：通常用70%或75%酒精为固定液。用商品供应95%酒精作稀释配制。取95%酒精加至需要稀释的浓度，再加[[蒸馏水]]到95ml即可；或者，可按下列稀释公式配制：

所需酒精浓度 ×配成酒精量=所需原酒精量（ml）原酒精浓度

配成酒精量-所需原酒精量=应加蒸馏水量（ml）

⑵福尔马林（37%～40%的甲醛水溶液）：常用固定液的浓度为5%～10%。如需保持中性，在配制过程中，可在500ml原液（37%～40%的甲醛水溶液）加入约2cm厚[[碳酸镁]]，或放几小块大理石（[[碳酸钙]]）中和之；也可采用下列配方配制（10%福尔马林）：福尔马林原液100ml，蒸馏水900ml，碳酸二氢钠（[[Na]]2H2PO4.H2O）4g，碳酸氢二钠（Na2H2PO4）0.5g混合配成。

⑶布氏（Bless）液：福尔马林原液7ml，酒精（70%）90ml，冰醋酸（临用前加入）3～5ml混合配成。

四、原虫[[低温]]保存

用液氮保存原虫，具有保持原虫[[生物学]]特性，且保存时间较长的优点。现仅介绍[[疟原虫]]、弓形虫、人毛滴虫及[[阴道]]毛滴虫的低温保存方法。

'''1.冻存方法'''

恶性疟原虫：将从受染者采得的抗凝含虫血或体外培养的[[培养物]]，经1500rpm离心10分钟，加入与沉积[[细胞]]等量的24%二甲基[[亚砜]]（DMSO）生理盐水溶液（0.9%生理盐水或5%[[葡萄糖]]生理盐水76ml中加入DMSO24ml）保护剂，充分混匀后在室温中放置30分钟，按0.5～1.0ml分装入[[无菌]][[安瓿]]（或塑料管）内，封口（或盖严）后将之放入标明批号的[[纱布]]袋中，装于液氮罐的提筒内，先置于液氮罐的[[颈部]]，该处约为-70℃，30分钟后，置液氮中（-196℃）冻存。

鼠疟原虫：从[[感染]]疟原虫第3～4天的小鼠[[心脏]]取血（或摘除[[眼球]]取血），注入[[试管]]，[[肝素]]抗凝，加入等量的10%或15%DMSO及15%或20%小牛[[血清]]为保护剂；或加入等体积的甘油、[[山梨醇]]保护液（4.2%山梨醇生理盐水180ml加纯甘油70ml），充分混匀。按照上法装管及冻存。也可以在1mm3阳性鼠血加0.1mm3的3.8%[[枸橼酸钠]]抗凝之后就装于液氮罐提筒中，立即直接置液氮中保存，2年内多数原虫仍有活力。

弓形虫：用[[无菌注射器]]吸取10%DMSO2ml，注入感染4天的小鼠腹腔，抽洗2次，抽出液混匀后即注入无菌塑料管内（0.5～1ml/管），冻存法同上。

阴道毛滴虫：用无菌拭子取[[阴道分泌物]]，放入[[培养基]]中培养48小时，转种于RPMI-1640培基中2天。取含虫[[培养液]]经1000rpm/min离心10分钟，在沉淀中加入10%DMSO2ml，同上法分装及冻存。

人毛滴虫：取[[腹泻]]患者的含虫粪便培养于洛氏培养基中48小时，转种于洛氏培养基或RPMI-1640培养基中培养2天后计算虫数（达7×105）。加等量10%DMSO并加Tween-20于DMSO中。装管同上法。但冻存过程应先将小管置于-10℃中15分钟，移到液氮罐颈2分钟，再置入液氮中冻存。

上述所用的保护剂（液）均应经[[高压灭菌]]，保存于4℃冰箱。RPMI-1640配制50%DMSO，用时再稀释所需浓度，加15%或20%小牛血清，调pH至7.2。

'''2.[[复苏]]与观察'''在冻存1～2年，需要时从液氮罐中取出保种的小管，迅速投入37～40℃温水中，经4～5分钟即溶化。取冻存的鼠疟原虫和弓形虫分别经腹腔[[接种]]2只小鼠，每只ml，观察致病情况；也可接种后4～5天分别取鼠血或腹腔液，作[[涂片]]，姬氏液[[染色]]，[[镜检]]原虫。两种毛滴虫可用同样方法复苏，但需经培养3～4天后，作涂片镜检活动[[滋养体]]，或染色观察。
{{Hierarchy footer}}
{{人体寄生虫学图书专题}}

寄生虫学/寄生虫标本的保存 - 版本历史

112.247.109.102：以“{{Hierarchy header}} 寄生虫标本的保存，除制成玻片标本永久保存外，还可用以下各种保存方法。 一、原虫包囊和虫卵...”为内容创建页面

112.247.109.102：以“{{Hierarchy header}} 寄生虫标本的保存，除制成玻片标本永久保存外，还可用以下各种保存方法。一、原虫包囊和虫卵...”为内容创建页面