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2014-01-26T14:22:44Z

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[[先天性疾病]]包括遗传性[[疾病]]，即[[亲代]]的病态[[基因]]经[[生殖细胞]][[配子结合]]形成[[合子]]时传给[[子代]]的疾病，和非[[遗传因素]]，如一些在[[配子]]形成，[[染色体]][[联会]]时的[[基因突变]]，[[受精卵]]以育等过程中由于某些外在因素的影响而引起和疾病。这类疾病表现为患儿智力，器官结构和功能和种种缺陷。

[[产前诊断]]中可将先天性遗传性关病分为三大类：

1．[[染色体病]]：由于遗传或环境因素引起染色体的数目及结构上的异常造成的疾病。在临床上可发现[[新生儿]]的有多种[[畸形]]并常伴有[[智力障碍]]。这类病红占出生总数的0.5%，产前诊断的25-50%。

2．单基因[[遗传病]]：仅有一对基因发生[[突变]]或异常引起的疾病。绝大多数表现为酶的缺陷。临床上称为先天性代谢病。目前能用[[生化]]方法诊断的约有300种，其中50%为[[常染色体]][[显性]]遗传，40%为[[常染色体隐性]]遗传，10%为[[性连锁]]遗传全以X[[伴性遗传]]为多见。一般占出生总数的1.8%，产前诊断的6-10%。

3．[[多基因]]遗传病：两对以上的多对基因突变。各对基因呈[[共显性]]，每对基因的作用是微小的，但若干对[[基因作用]]积累，或形成一个明显的效应，在临床上出现一个[[病状]]群，主要表现为一些[[先天畸形]]，如唇、[[腭裂]]和[[畸形足]]、[[脊柱裂]]、[[无脑儿]]、[[神经管]]畸形、[[幽门狭窄]]、[[先天性髋关节脱位]]、[[先天性心脏病]]等，这类病占出生总数的2.6%，产前诊断的40-50%。某些多基因异常遗传病，如I型[[糖尿病]]、[[高血压病]]、[[冠心病]]、[[哮喘]]、[[精神分裂症]]等常是遗传因素与环境因素共同作用的结果，它只能从群体调查和空族[[系谱]]的[[发病率]]中了解其分布及复现率。

'''一、染色体病[[核型]]分析'''

核型分析主要用于检查染色体因娄衢虞结构异常而造成的遗传性疾病。一般是将新鲜的[[羊水]]20-30毫升，经离心得到羊水中的[[细胞]]，经RPMI1640[[培养液]]与25%小牛[[血清]]中培养8-10天后，以[[秋水仙素]]处理，使细胞均停止在M期，经获得分裂相细胞，将细胞经低参、固定、制片处理后，进行Giemsa[[染色]]或用[[显带]]染色，然后进行核型分析。

'''二、[[性染色质]]检查和性别[[基因诊断]]'''

（一）性染色质检查

[[羊水细胞]]性染色质的检查有助于诊断性连锁性遗传病(sex linked inheritance disease,)如甲、乙型[[血友病]]，[[原发性]][[低丙种球蛋白血症]]，自毁容貌[[综合征]]，[[肌营养不良]]，G-6PD缺乏症。[[粘多糖沉积病]]二型，[[糖原]][[代谢]]病二型如果父亲为X-[[连锁隐性]]基因[[携带者]]，携带者，父亲正常，则男胎一半正常，一半工半为患者；女胎一半正常，一半为基因携带者，可根据检测结果决定是否继续[[妊娠]]。常规的检查方法是将羊吕10毫升注入[[离心管]]，以1000r/min1离心0min弃上清，管底沉淀物加[[甲醇]][[冰乙酸]]液8ml固定30min，按前述条件离心弃上清，再加少许新鲜固定液制备成细胞悬液，取1-2滴于[[载玻片]]上，空气中干燥待染色。

羊水细胞制片选用于：①X[[染色质]]检查（examination of X chromatin 或Barr rest）：一般采用硫瑾或[[甲苯胺蓝]]染色，经油镜观察。镜下可见到两类[[细胞核]]，一类核大，[[核膜]]完整，结构清晰，染色质均匀，称可数细胞；加一类核小固缩或染色过深，结构分辨不清或核重叠，有破损，为非或细胞。在可数细胞的核膜内缘处，见到呈深蓝色的三角形，半圆形或馒头形的染色质块，其大小约1.2μm×0.7μm 左右，即X染色质，记录X性染色质的细胞当选目算出其百分率。X染色质≥6%者判为女胎，≤5%者判为男胎。②Y染色质的检查采用阿的平荧光染色，在[[荧光显微镜]]下观察，可峥细胞核的偏中心部或近核膜处有 0.3μm大小的荧光弧状圆点，轮廓清晰，较其周围的[[核质]]荧光屏光为强，有时荧光点过大或过小，所发荧光很强，与其余核质所荧光分开，这种[[荧光小体]]就是Y染色质。当荧光点过大或过小，所发荧光很弱与核质荧光无区别时，则不是Y染色质。选择核均匀，核完整清晰的可数细胞，计算出有Y染色质细胞的百分率，Y染色质细胞≥5%诊断为男胎，&lt;4%妇胎。如羊水细胞中X、Y小体同时大于等于5-6%应考虑是否为[[性染色体]]数量异常，此种病例应直一步分析核型。

（二）、性别基因诊断

目前随着基因的诊断技术发展，[[胎儿]]性别诊断有了更准确、更灵敏的方法，使对于性连锁[[疾病诊断]]的正确性可靠性大为提高。最常用的方法是：

1．Y特异[[DNA]][[探针]]对人性别诊断，有关Y染色体DNA的探针有多种，如PHY3.4，PHY2.1等，目前最公认的是Y染色体特异的SRY基因，在男性[[性别决定]]中起关键作用。将羊水细胞用细胞裂解液解后，点于[[硝酸纤维膜]]上与32P标记SRY[[基因探针]]直接进行[[斑点杂交]]，或将羊水细胞DNA经0.7%[[琼脂糖凝胶电泳]]分离后进行Southern印迹杂交，凡出现杂交斑点或代的为男性，不显示或显示极弱者为女性。

2.PCR[[基因扩增]]法测定性别以常规[[蛋白酶]]-SDS-酚法提取羊水细胞DNA0.1-1.0μg或直接羊水细胞裂解得到DNA为模板，进行PCR基因扩增测定胎儿性别，用于产前诊断胎儿性别的Y染色体基因有4种：DYZ1，DYS14，ZFY和SRY。目前认为SRY是睾刃决定因子的最佳候选基因，以两对SRY基轩HMGRox[[保守序列]]的[[引物]]进行DNA[[扩增]]1.5%[[琼脂糖]]电泳，溴化已锭染色，根据фXHae[[分子量]]标准，男性胎儿在分子量为271bp处可见一SRY特异区带。

'''三、生化及[[免疫学]]检查'''

羊水是清液的生化及免疫学检查主要用于遗传性代谢的病的检测。目前已知的遗传性代谢病有3000多种，有89种可进行产前诊断。这些先天性代谢病产前诊断方法大都比较复杂。目前临床实验室能够开展一些简单方法主要用于[[粘多糖]]沉各种[[积病]]，开放性[[神经管缺陷]]和某些酶缺陷的检查。

（一）粘多糖沉积病的检查

粘多糖沉积病是由于细胞[[溶酶体]]酸性[[水解酶]]先天性缺陷所致。根据病因目前本病可分为八大类型，我国已报告200从余例，主要表现为严重的[[骨骼]]畸型、肿[[脾肿大]]，智力障碍以及其它畸形。粘多糖沉积病产前诊断以测定培养羊水细胞内特异的酶活力最为可靠，但实验要求高，一般实验室难开展。两种较简单的实用的方法是甲苯胺蓝定性及[[糖醛酸]]法半定量测定。

1．甲苯胺蓝定性：方法同尿液粘多糖检查。妊娠早期羊水正常者可呈阳性，妊娠中后期为阴性如阳性提示胎儿患粘多糖沉积病。

2．糖醛酸半定量测定：羊水中[[酸性粘多糖]]与四[[硼酸]]钠[[硫酸]]溶液反应生成糖醛酸，以每毫无[[肌酐]]中糖醛酸的量反映酸性糖[[多糖]]的多少。随着妊娠的进展，糖醛酸含量逐渐减少，妊娠16-20周的参考值为3.3-7.0mg/mgCr，如高于此值应考虑有粘多糖沉积肥病。本法除Morguio综合征外对其它类型的粘多糖沉积病均有诊断意义。

（二）神经管缺陷的检查

1．[[甲胎蛋白测定]]神经管缺陷在产前诊断中占有很大的比例。而羊水[[甲胎蛋白]]的测定目前诊断神经管缺陷的常规方法。[[AFP]]主要在胎儿[[肝脏]]及[[卵黄囊]]内合成，羊中AFP来自胎儿尿，小部分来自胎儿[[胃肠道]]信[[羊膜]]，绒毛膜细胞。正常妊娠羊水中AFP在妊娠15周时最高，可达40mg/L，20-22周逐步下降，23周后稳定下降，32周后降至25mg/L并一直维持此水平至足月。开放性神经管缺陷的胎儿，如无脑儿和脊柱裂，胎血内的AFP可从暴露的[[神经组织]]和[[脉络丛]]渗入羊水，使AFP高于正常10倍以上。羊水中AFP测定对胎儿神经管缺陷诊断属非特异性的检查。胎儿血中AFP含量比羊水高150-200倍，故[[穿刺]]伤及胎儿及[[胎盘]]，可出现假性升高此点必须注意。AFP测定需将妊娠中期羊水上清稀释100倍后，按血清AFP免疫学方法测定。

AFP除用羊水检测外亦可用母体血筛查，诊断开放糖果经管畸形的准确率达90%以上，因此具有特殊诊断价值。此外胎儿其它畸形如先天性肾疾病、[[食道闭锁]]、[[脑积水]]、骶尾畸形瘤、[[染色体异常]]，糖尿病，[[先兆子痫]]等各种原因引起的胎盘功能不足，[[流产]]，胎死宫内等，羊水AFP也可升高。

2．羊水总[[胆碱酯酶]]测定：常用于确认升高的羊水AFP水平。羊水含有的[[胆碱]]酸酶依其对乙酰胆碱的亲和力差异，分为真性胆碱酯酶和假性胆碱酯酶两种。胎儿早期机体内即已合成CHE，于妊娠12周时可测得羊不中CHE显著升高，当胎儿[[神经]]稍不成熟时，从胎儿的禽脊液和[[血液]][[渗出]]到羊水中的CHE比成熟时为多，故做为羊水TCHE测定，可用于对开入性神经管缺陷的诊断。测定方法为用丙酰硫代胆碱或[[乙酰]]硫代碱用为[[底物]]，5，5-二硫代双为显色剂的速率法或终点法。

3．羊水中真性[[乙酰胆碱酯酶]]测定羊水中真性[[乙酰胆碱]]脂酯活性能增加与胎儿开入性神经管畸形高度相关，ACHE定性的[[聚丙烯酰胺]]凝臁电泳分析是当前常用的方法，特别是对于神经管畸形可疑症的确诊。该方法首先经PH8.1电泳将PCHE和ACHE分开，再根据酶学反应原理，与CHE底物乙酰硫低胆碱和反映示剂共同[[温育]]，CHE分解底物产生的硫代碱胆与铜离子反应形成[[复合物]]，在酶区事业出现白色沉淀线。正常羊水电泳后可见一条慢速的PCHE区带，快速的ACHE区带极微。开入神经管缺陷羊水可见明显的快泳的ACHE区带，而同时平等加入ACHE特异[[抑制剂]]BW284C51的样品电泳后，可见此ACHE区带消失。ACHE定性电泳时一定要做阳性与阴性对照，以保证结合判断准确无误，涨[[胶电泳]]分析为[[无脑畸形]]和开入性脊柱裂的筛诊阳性率可达到99.5%，但胎儿患[[脐疝]]流产和其它严重先天畸形进羊水ACHE也可阳性。因此对于诊断结论，决定是否完成或终止妊娠必须结合其它检查综合考虑。

（三）[[胰腺]][[纤维囊]]性变的检查

1．γ-[[谷氨酰转移酶]]测定：正常妊娠羊水GGT活性以妊娠14-15周时最为高，约为母体[[血浆]]的10-100倍，然后渐降，至胎龄30-40周时，只有15周时的1/40。于15周左右测定GGT的产前的早期诊断胰腺纤维囊性变的最佳指标，预测准确性达77-84%，GGT下降的原因是富含GGT的[[小肠]][[微绒毛]]停止发育或有酶的抑制物释入羊水所至。此外胎儿的染色的体病，如21三体或18三体综合征畸胎GGT也明显的下降。

2．碱性[[磷酯酶]]测定羊水[[ALP]]在妊娠19周左右活性最高，然后渐降，至29周后活性降至产前水平。在妊娠16-24周羊水ALP中3/4为小肠型，1/4为肝、骨、肾型。胎儿胰腺纤维囊性变时由于肠粘膜表面微绒毛异常而致小肠型ALP极度下降，此外可协助诊断此外21三体18三体综合征畸胎也可见ALP活性降低。

（四）[[死胎]]的检查

1．肌酯[[激酶]]测定羊水[[CK]]活性与胎龄无关，在正常孕妇羊水中约为其血清浓度的1/5或更低，主工为CK-BB。羊水中CK升高主要来源于死胎组织的[[骨骼肌]]分解，所以CK活性与死亡时间呈[[正相关]]，而且是CK-MM升高。此外[[畸胎瘤]]、[[腹裂]]或无脑畸胎羊水的CK-BB含量亦可升高。

2．[[乳酸脱氢酶测定]]死胎羊水[[LD]]活性明显升高，但由于宫内组织损伤，羊水受[[红细胞]]污染等均可引起羊水LD增高，故特异性不强。

'''四、羊水细胞内酶分析'''

采用微时测定法测定羊水细胞中某种酶的活性，诊断胎儿是否有此种酶的异常。方法是将羊水细胞放在铺有聚酯膜的塑料[[培养皿]]中培养8-14天，待细胞生长到1000-10000个时，迅速将长有细胞的培养皿[[冰冻干燥]]，然后在[[显微镜]]下将其切成含10-20个细胞的小片，在[[石蜡]]的保护下，将其与少量底物保温，当细胞和底物发生反应后，用[[毛细管]]吸出已形成的荧光显色产物，在[[显微分光光度计]]或显微荧光光度计下进行测定。酶缺陷[[纯合子]]者不显色。[[杂合子]]者显色较正常对照减低。

'''五、[[基因工程]]用于产前诊断'''

1．DNA[[分子杂交]]法，用已知的一段互补DNA作为探针，经放射标记后与羊水细胞的DNA进行印迹杂交，并用[[放射自显影]]法得出结果，来诊断胎儿的遗传性疾病，如用[[珠蛋白]]α基因片段两个探针检测α珠蛋白生成障碍性[[贫血]]。

2．[[限制性内切酶]][[多态性]][[位点]]的[[连锁分析]]DNA限制性内切酶能识别特定的[[碱基顺序]]，因而能在只别位点特异地把NDA切割成各种一定大小的片段，通过琼脂糖凝胶电泳的分离，直接用溴化乙锭显色或用Southern[[印迹法]]把这些NDA片段转移到硝酸纤维膜上，再与已用[[核素]]标记的特异基因探针进行NDA分子杂交，采用放射自显影技术，显示出相应的NDA片段，从而可鉴定出是否有基因缺失或异常，例如中国人β珠蛋白生成障碍性贫血的RELP连锁分析。

3．利用PCR技术扩增NDA探测致病基因利用PCR技术可将一个[[基因拷贝]]放大10万倍，所得大量均一的NDA再用[[寡核苷酸探针]]杂交，放射自显影和[[酶切位点]]分析探测致病基因。至今利用PCR可推测的遗传病约有50多种。

以上这些[[分子]][[生物学]]技术已广泛用于遗传性疾病的产前诊断如[[镰状细胞]]性贫血，Bart[[水肿]]胎儿、HBH病信其它α珠蛋白生成障碍性贫血基因携带者、β珠蛋白生成障碍性贫血、甲型血友病、α-[[抗胰蛋白酶缺乏症]][[苯丙酮尿症]]、杜氏进行性肌营养不良、[[视网膜母细胞瘤]]、Wilson病、Huntington[[舞蹈病]]等，做为先天性遗传性疾病的诊断技术必将有广泛的应用前景。
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