https://www.yiliao.com/index.php?action=history&feed=atom&title=%E5%9F%BA%E5%9B%A0%E8%AF%8A%E6%96%AD%E4%B8%8E%E6%80%A7%E7%97%85%2FPCR%E7%9A%84%E5%9F%BA%E6%9C%AC%E5%8E%9F%E7%90%86%E5%92%8C%E5%9F%BA%E6%9C%AC%E7%A8%8B%E5%BA%8F 2026-04-25T23:53:21Z 本wiki的该页面的版本历史 MediaWiki 1.35.1 https://www.yiliao.com/index.php?title=%E5%9F%BA%E5%9B%A0%E8%AF%8A%E6%96%AD%E4%B8%8E%E6%80%A7%E7%97%85/PCR%E7%9A%84%E5%9F%BA%E6%9C%AC%E5%8E%9F%E7%90%86%E5%92%8C%E5%9F%BA%E6%9C%AC%E7%A8%8B%E5%BA%8F&diff=149139&oldid=prev 2014-02-05T14:07:50Z

<p>以“{{Hierarchy header}} PCR<a href="/%E6%89%A9%E5%A2%9E" title="扩增">扩增</a><a href="/DNA" title="DNA">DNA</a>的原理是：先将含有所需扩增分析序列的靶DNA双链经热变性处理解开为两个<a href="/index.php?title=%E5%AF%A1%E8%81%9A&amp;action=edit&amp;redlink=1" class="new" title="寡聚（页面不存在）">寡聚</a><a href="/%E6%A0%B8%E8%8B%B7%E9%85%B8" title="核苷酸">核苷酸</a>...”为内容创建页面</p> <p><b>新页面</b></p><div>{{Hierarchy header}}<br /> PCR[[扩增]][[DNA]]的原理是：先将含有所需扩增分析序列的靶DNA双链经热变性处理解开为两个[[寡聚]][[核苷酸]][[单链]]，然后加入一对根据已知DNA序列由人工合成的与所扩增的DNA两端邻近序列互补的寡聚核苷酸片段作为[[引物]]，即左右引物。此引物范围就在包括所欲扩增的DNA片段，一般需20-30个[[碱基对]]，过少则难保持与DNA单链的结合。引物与互补DNA结合后，以靶DNA单链为模板，经反链杂交[[复性]]（退火），在Taq DNA[[聚合酶]]的作用下以4种三磷酸[[脱氧核苷]]（dNTP）为原料按5'到3'方向将[[引物延伸]]、自动合成新的DNA链、使DNA重新复制成双链。然后又开始第二次循环扩增。引物在反应中不仅起引导作用，而且起着特异性的限制扩增DNA片段范围大小的作用。新合成的DNA链含有引物的互补序列，并又可作为下一轮聚合反应的模板。如此重复上述DNA模板加热变性双链解开—引物退火复性—在DNA聚合酶作用下的引物延伸的循环过程，使每次循环延伸的模板又增加1倍，亦即扩增DNA产物增加1倍，经反复循环，使靶DNA片段指数性扩增。<br /> <br /> PCR的扩增倍数Y=（1+E）n,这里Y是扩增量，n为PCR的循环次数。E为PCR循环扩增效率。设PCR扩增效率E为100%、循环次数n=25次，靶DNA将扩增到33554432个拷贝，即扩增3355万倍：若E为80%、n=20、则扩增数量将下降到1408865拷贝，即扩增产物约丢失93%，若E=100%，n=20，则扩增数量减少1048576个拷贝，扩增产物约减少97%。可见PCR循环扩增效率及循环次数都对扩增数量有很大影响。PCR扩增属于[[酶促反应]]，所以，DNA扩增过程遵循酶促动力学原理。靶DNA片段的扩增最初表现为直线上升，随着靶DNA片段的逐渐积累，当引物—模板/DNA/聚合酶达到一定比值时，酶的促化反应趋于[[饱和]]，此时靶DNA产物的浓度不再增加，即出现所谓平台效应。PCR反应达到平台期的时间主要取决于反应开始时样品中的靶DNA的含量和扩增效率，起始模板量越多到达平台期的时间就越短、扩增效率越高到达平台期的时间也越短。另外酶的含量，dNTp 浓度，非特异性产物的扩增都对到达平台期时间有影响。<br /> {{Hierarchy footer}}<br /> {{基因诊断与性传播疾病图书专题}}</div>

112.247.67.26