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2014-02-05T10:27:31Z

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[[限制性核酸内切酶]]（restrictionendonuclease），又简称[[限制酶]]或[[内切酶]]。它们是[[基因工程]]和[[基因诊断]]重要的一类工具酶。它们的发现和应用为从[[基因组]]中分离目的[[基因]]提供了必要的手段.限制酶能特异地识别和切割特异的[[核苷酸序列]]，将双链[[DNA]]切成较小的片段。酶切后目的基因可能完整地或部分地保存于某一DNA片段上，并被分离出来。

限制酶主要来源于[[原核生物]]，是一组能水解DNA[[磷酸二酯键]]的酶。迄今已发现的限制酶多达数百种，分为三类。在基因工程中使用的主要是第二类。限制酶根据其来源命名。例如，限制酶EcoRⅠ来源于大[[杆菌]]E.coli的RY13[[菌株]],Ⅰ指在该菌株中分离的第一个限制酶。

{{图片|gv2141sf.gif|}}

下面是一些最常用的限制酶的来源及其识别顺序(表13-1)

每种限制酶识别和切割的通常为4-6个核苷酸序列,称为限制性[[位点]](restriction sites)或切点.[[限制酶切]]割双链DNA的方式有两种，产生的末端也有两种：第一种是交错切割，即两条链的切点不在同一水平而是相隔数个[[碱基]]，故断口产生两小段自身互补的[[单链]]，这种末端容易互补连接，称为[[粘性末端]]（cohesive terminus）；第二种为平整切割，即两　

表13-1 常用的限制酶的来源及其识别顺序列

{| class="wikitable"
|-
| | 名称
| | 识别序列
| | 来源
|-
| | Ava
| |
{| class="wikitable"
|-
| rowspan="2" | C↓(
| | C
| rowspan="2" | )CG(
| | A
| rowspan="2" | )G
|-
| | T
| | G
|}
| | Anabaena variabilis
|-
| | Bam H
| | G↓GATCC
| | Bacillus amyloliquefaciens H
|-
| | Bgl Ⅱ
| | A↓GATCT
| | Bacillus globigii
|-
| | Eco RⅠ
| |
{| class="wikitable"
|-
| rowspan="2" | G↓
| | *
| rowspan="2" | ATTC
|-
| | A
|}
| | Escherichia coliRY13
|-
| | Eco RⅡ
| |
{| class="wikitable"
|-
| rowspan="2" | ↓CC(
| | A
| rowspan="2" | GG
|-
| | T
|}
| | Escherichia coliR245
|-
| | HaeⅢ
| |
{| class="wikitable"
|-
| rowspan="2" | GG↓
| | *
| rowspan="2" | C
|-
| | C
|}
| | Haemophilus aegyptius
|-
| | HindⅢ
| |
{| class="wikitable"
|-
| | *
| rowspan="2" | ↓AGCTT
|-
| | A
|}
| | Hemophilus influenzae Rd
|-
| | HpaⅠ
| | GTT↓AAC
| | Haemophilus parainfluenzae
|-
| | HpaⅡ
| |
{| class="wikitable"
|-
| rowspan="2" | C↓
| | *
| rowspan="2" | GG
|-
| | C
|}
| | 同上
|-
| | KpnⅠ
| | GGTAC↓C
| | Klebsiella pneumoniae
|-
| | MboⅠ
| | ↓GATC
| | Moraxella bovis
|-
| | PstⅠ
| | CTGCA↓G
| | Providencia stuartii
|}
*被[[甲基化]]

条链在同一水平切开，得到平齐末端（blunt terminus）(图13-2)。由于具有相同粘性

{{图片|gv214469.jpg|限制酶的两类切割方式}}

图13-2 限制酶的两类切割方式

末端的DNA片段在DNA[[连接酶]]的作用下很容易共价连接，因此被广泛地应用于[[重组DNA]]操作中。具有相同平齐末端的DNA片段也可以连接，但连接效率只有粘性末端连接效率的1％。

限制酶的上述特性在基因工程和基因诊断中具有重要用途：①首先不论DNA的来源如何，用同一种内切酶切割后产生的粘性末端很容易重新连接，因此很容易将人和[[细菌]]或人和[[质粒]]任何两个DNA片段连接在一起，即重新组合，这是重组DNA技术的基础。②人类的基因组很大，不切割无法分析其中的基因。限制酶能把基因组在特异的部位切开，即切割不是随机的，因而从每个[[细胞]]的基因组得到的是相同的一组长度各异的片段。这些可能含有某一基因的片段可用电泳分离，并加以研究。③由于限制酶的特异性，如果[[识别位点]]的碱基发生了改变，限制酶将不再能切割；同样，碱基的改变也可能导致出现新的酸切位点。在人类基因组中，这两种情况是十分常见的，而切点的消失或出现将影响获得的DNA片段的长度，表现为限制性片段长度[[多态性]]（RFLP），这在基因的连锁诊断中具有极重要的意义。
==参看==
*[[限制性核酸内切酶]]
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医学遗传学/限制性核酸内切酶 - 版本历史

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