112.247.67.26：以“{{Hierarchy header}} 基因探针（probe）就是一段与目的基因或DNA互补的特异核苷酸序列，它可以包括整个基因，也可以...”为内容创建页面

2014-02-05T10:30:00Z

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[[基因探针]]（probe）就是一段与目的[[基因]]或[[DNA]]互补的特异[[核苷酸序列]]，它可以包括整个基因，也可以仅仅是/基因的一部分；可以是DNA本身，也可以是由之[[转录]]而来的[[RNA]]。

'''1．[[探针]]的来源''' DNA探针根据其来源有3种：一种来自[[基因组]]中有关的基因本身，称为[[基因组探针]]（genomic probe）；另一种是从相应的基因转录获得了mRNA，再通过[[逆转录]]得到的探针，称为cDNa 探针（cDNa probe）。与基因组探针不同的是，cDNA探针不含有[[内含子]]序列。此外，还可在体外人工合成[[碱基]]数不多的与基因序列互补的DNA片段，称为[[寡核苷酸探针]]。

'''2．探针的制备''' 进行[[分子]][[突变]]需要大量的探针拷贝，后者一般是通过[[分子克隆]]（molecular cloning）获得的。克隆是指用无性繁殖方法获得同一个体、[[细胞]]或分子的大量复制品。当制备基因组DNA探针进，应先制备[[基因组文库]]，即把基因组DNA打断，或用限制性酶作不完全水解，得到许多大小不等的随机片段，将这些片段体外[[重组]]到运载体（[[噬菌体]]、[[质粒]]等）中去，再将后者[[转染]]适当的[[宿主]]细胞如[[大肠]]肝菌，这时在[[固体培养基]]上可以得到许多携带有不同DNA片段的克隆噬菌斑，通过[[原位杂交]]，从中可筛出含有目的基因片段的克隆，然后通过细胞[[扩增]]，制备出大量的探针。

为了制备cDNA 探针，首先需分离[[纯化]]相应mRNA，这从含有大量mRNA的组织、细胞中比较容易做到，如从[[造血细胞]]中制备α或β[[珠蛋白]]mRNA。有了mRNA作模板后，在[[逆转录酶]]的作用下，就可以合成与之互补的DNA(即cDNA)，cDNA与待测基因的[[编码区]]有完全相同的[[碱基顺序]]，但内含子已在加工过程中切除。

寡核苷酸探针是人工合成的，与已知基因DNA互补的，长度可从十几到几十个[[核苷酸]]的片段。如仅知[[蛋白质]]的[[氨基酸]]顺序量，也可以按氨基酸的密码推导出核苷酸序列，并用[[化学]]方法合成。

'''3.探针的标记''' 为了确定探针是否与相应的基因组DNA杂交，有必要对探针加以标记，以便在结合部位获得可识别的信号,通常采用[[放射性同位素]]32P标记探针的某种核苷酸α[[磷酸基]]。但近年来已发展了一些用非同位素如[[生物素]]、[[地高辛]][[配体]]等作为[[标记物]]的方法。但都不及[[同位素]]敏感。非同位素标记的优点是保存时间较长,而且避免了同位素的污染。最常用的探针标记法是[[缺口平移]]法(nicktranslation)，其原理如图13-1。首先用适当浓度的DNA酶Ⅰ（DNAseⅠ）在探针DNA双链上造成缺口，然后再借助于DNA[[聚合酶]]Ⅰ（DNa poly merasⅠ）的5’→3’的外切[[酶活性]]，切去带有5’[[磷酸]]的核苷酸；同时又利用该酶的5’→3’聚酶活性，使32P标记的互补核苷酸补入缺口，DNA聚合酶Ⅰ的这两种活性的交替作用，使缺口不断向3’的方向移动，同时DNA链上的核苷酸不断为32P标记的核苷酸所取代。

{{图片|gv213mlr.jpg|缺口平移标记法粗线示标记部分}}

图13-1 缺口平移标记法粗线示标记部分

探针的标记也可以采用随机[[引物]]法，即向变性的探针溶液加入6个核苷酸的随机DNA小片段，作为引物，当后者与[[单链DNA]]互补结合后，按碱基互补原则不断在其3’OH端添加[[同位素标记]]的[[单核苷酸]]，这样也可以获得比[[放射性]]很高的DNA探针。
==参看==
*[[基因探针]]
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医学遗传学/基因探针 - 版本历史

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