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2014-02-05T10:03:11Z

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上述传统的HLA分型方法有许多不足之处，近年来国内外已将HLA分型技术由[[抗原]]水平发展到[[基因]]水平。

'''（一）限制性片段长度[[多态性]]检测技术'''

这是首先建立的对多态性进行检测的[[DNA]]分析技术。个体间抗原特异性来自[[氨基酸]]顺序的差别，后者由编码基因的[[碱基顺序]]不同所决定。这种碱基顺序的差别造成[[限制性内切酶]]识位置及[[酶切位点]]数目的不同，从而产生数量和长度不一的DNA酶切片段。用特异性[[探针]]对整个[[基因组]]DNA酶切片段进行杂交，即可分析限制性长度片段多态性（restriction fragment lengthpolymorphism,RFLP）。一定的[[内切酶]]组合所得到的HLA-RFLP可以和传统方法测定的HLA特异性型别相关。80年代末发展起来的PCR（polymerase chain reaction）技术已被用于RFLP分析，即用等位特异[[限制酶]]裂解PCR[[扩增]]的片段，然后再进行分析，从而大提高了灵敏度。

'''（二）PCR/SSO技术'''

此法乃用人工合成的HLA型别特异的[[寡核苷酸]]序列作为探针，与待检[[细胞]]经PCR扩增的HLA基因片段杂交，从而确定HLA型别，PCR技术可将HLA[[复合体]]上指定基因片段特异性地扩增5～6个数量级；而专门设计的SSO（序列特异的寡核苷酸sequencedpecific oligonucleotide）探针又能探测出[[等位基因]]间1～2个[[核苷酸]]的差异，故PCR/SSO技术具有灵敏度、特异性强、需[[样本量]]少等优点。

'''（三）PCR/SSP技术'''

目前常规的HLA-DNA分型技术，包括上述的PCR/RFLP、PCR/SSO等，最终均需用标记的特性探针与扩增产物进行杂交，再分析结果。PCR/SSP方法用乃设计出一整套等位基因组特异性[[引物]]（sequence specific primer,SSP），借助PCR技术获得HLA型别特异的扩增产物，可通过电泳直接分析带型决定HLA型别，从而大大简化了实验步骤。

由于传统方法在Ⅱ[[类抗原]]分型方面困难较大，故上述几种基因分析型方法目前主要用于Ⅱ类基因座。此外，目前已建立的HLA基因分型技术还包括PCR[[单链]]构像多态性分析（PCR-single strand conformational polymorphism，PCR-SSCP）和PCR [[异源二聚体]]电泳多态即PCR[[指纹图]]（PCr fingerprinting）分析。DNA分型技术的应用，使HLA型别分析达到了更精细的水平，并因此发现了更多的HLA多态性。HLA的DNA分型技术现已成为[[血清学]]方法的竞争者，并可能在不久的将来完全取而代之。

HLA是目前所知人体最复杂的[[遗传]]多态性系统。HLA研究涉及[[免疫学]]、[[生物学]]、遗传学、[[分子]]生物学、医学等多个学科，并已发展成为一个独立的学科分支。迄今HLA研究已达到相当深入的水平，并在诸多方面取得显著进展，包括HLA复合体结构；HLA分子结构及其表达的调控；HLA分子功能，尤其是在抗原处理、呈递及T[[细胞识别]]中的作用；HLA的DNA分型及多态性研究；HLA与[[疾病]]的关系；HLA与[[移植]]的关系等。HLA研究不仅使[[器官移植]]成为一种极有价值的治疗手段，并给基础与临床免疫带来了突破性进展。已经证实，HLA复合体中存在控制[[免疫应答]]的基因以及HLA参与约束[[免疫细胞]]间相互作用，这表示HLA涉及[[生命活动]]的各个水平与多个方面。可以预期，对HLA的研究将继续成为[[免疫遗传学]]最活跃的部分；对HLA的应用将扩展到基础、临床、预防医学的各个领域。
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医学免疫学/HLA的DNA分型技术 - 版本历史

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