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2014-02-05T10:04:06Z

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[[细胞免疫]]（CMⅠ）是由多种[[细胞]]相互作用的结果。[[免疫细胞]]间相互作用导致多种[[细胞因子]]的释放。因此细胞功能测定不仅涉及T细胞的数量和功能与包括各类因子活性测定，因此评价机体的细胞免疫功能不仅程序复杂，且很难标准化

== 一、迟发型[[过敏反应]]的体外检测方法==

[[皮肤]]试验和接触性[[过敏]]的诱发是检测迟发型过敏反应（DTH）的两种常用方法。皮肤试验中诱发对曾经使病人[[致敏]]的[[抗原]]的再次应答，而接触性过敏是测试受者对从未接触过的物质发生致敏的能力。

1．皮肤试验用皮肤试验诊断DTH，常用的抗原有[[结核菌纯蛋白衍生物]]（PPD）、[[腮腺炎病毒]]、念珠菌素等，在人类试验时在[[前臂]][[皮内注射]]少量[[可溶性抗原]]，24～48小后，测量[[红肿]][[硬结]]的大小，硬结直径大于10mm即被看作为阳性。表明受试者对该[[病原菌]]有了一定的细胞免疫能力，若皮试无反应，可用更高浓度的抗原重复试验，若仍无反应即为阴性，需排除皮试技术误差，也可能受试者从未接触过此抗原，也可能由于细胞免疫功能缺损，或由于细胞免疫功能缺损，或由于严重[[感染]]（[[麻疹]]、慢性[[播散性结核]]）造成的无反应性。

2．接触性过敏常应用[[低分子量]][[化合物]]如[[二硝基氯苯]]（DNCB）诱生接触性过敏。化合物与皮肤[[蛋白质]]结合而导至DTH反应。在[[动物试验]]时，初次皮肤上涂抹DNCB后间隔7～10天再激发刺激，则皮肤出现即为阳性。此试验人类已不使用。

== 二、细胞免疫的体外检测方法==

体外检测[[淋巴细胞]]的数量和功能，最易采集的是[[血标本]]，首先需分离或[[纯化]]淋巴细胞，一般使用萄[[聚糖]]-[[泛影葡胺]]配成[[比重]]为1.077的淋巴细胞分层液，当将[[血液]]重叠于淋巴细胞分层液之上离心时，由于[[红细胞]]（1.092）、[[多形核白细胞]]（1.090）、淋巴细胞（1.070）的比重不同而相互分开。淋巴细胞和[[单核细胞]]在[[血浆]]和分层液交界处形成一薄层。仔细分出这一薄层的细胞，其中淋巴细胞占80%，单核细胞占20%，淋巴细胞中T细胞占80%，B细胞占4%～10%，其作为非DT、非B细胞。

'''1．T[[细胞计数]]'''

（1）E花环法：人类T[[细胞表面]]有SRBC[[受体]]（CD2）能与SRBC结合形成[[玫瑰花]]环样结构，将经分层液分离现的RBM悬液与SRBC在含有[[血清]]的平衡盐水中混合，经37℃培养5～10分钟放4℃过夜，取细胞悬计数，外周[[血淋]]巴细胞中约70%～80%淋巴细胞结成花环即为T细胞。目前此方法已用来分离T细胞，而不用做T细胞计数。

（2）用[[单克隆抗体]]计数T细胞：将人的PBM分成三等份，分别用小鼠抗人CD3、CD4和CD8的单克隆抗体作第一[[抗体]]与细胞结合，再用FITC标记的兔抗小鼠[[IgG]]抗体作第二抗体进行间接免疫荧光[[染色]]，在[[荧光显微镜]]下或[[流式细胞仪]]检测结果，在PBM中被CD3抗体染上荧光的细胞称为CD3+细胞即总T细胞。正常人在PBM中T细胞占70%～80%。正常人的CD4+细胞和CD8+细胞之和应与CD3+细胞数一致。CD4+细胞与CD8+细胞的比值正常人约为2/1而[[艾滋病]]患者则比值小于1.7。

'''2．T细胞[[活化]]试验''' T细胞能被非特异的物质称为[[有丝分裂]]原所激活而向[[淋巴母细胞]]转化。T细胞转化过程可伴随有[[DNA]]、[[RNA]]、蛋白质的合成增加，最图导致细胞分裂。在[[光学显微镜]]下可计数转化后的淋巴细胞数，也可用氚标记的[[胸腺嘧啶核苷]]（3HTdR）掺入正在分裂的淋巴细胞，用液闪测定仪检查掺入正在分裂的淋巴细胞，用液测量仪检查掺入的3H-TdR的多少确定淋巴细胞转化率。最近有一种不用[[同位素]]，又可用仪器测量的淋巴细胞[[增殖]]反应的检查法，称为MTT检测法，MTT是一种甲氮唑盐，它是细胞[[线粒体]][[脱氢酶]]的[[底物]]，细胞内的酶可将MTT分解产生蓝黑色甲（fromazan）产物。该产物的多少与活性细胞数[[正相关]]。结果可用酶标检测仪（595mm）测量汇丰银行密度，做为MTT法的检查指标。此法的结果与3H-TdR掺入法平行，并能反应试验中的活细胞数（表20-3）。

表20－3　淋巴细胞增殖反应的刺激物

{| class="wikitable"
|-
| | [[分裂原]]
| | T细胞
| | B细胞
|-
| | [[植物血凝素]]（PHA）
| | +
| | －
|-
| | [[刀豆]][[蛋白]]A（ConA）
| | +
| | －
|-
| | 美洲[[商陆]]（PWM）
| | +
| | +
|-
| | [[葡萄球菌]]蛋白A（SPA）
| | ±﹡
| | +
|-
| | [[副伤寒]]杆B（SPB）
| | ±
| | +
|}

注： PWH主要是T细胞分裂原，也可通过刺激T[[细胞分泌]]可溶性因子诱导B细胞增殖[[分化]]；

﹡SPA诱导B细胞分裂不需要T细胞协助，但诱导B细胞激活抗体[[分泌细胞]]需要T细胞协助

'''3．[[细胞毒试验]]''' [[TC]]细胞、NK细胞、[[LAK细胞]]、TIL细胞对其[[靶细胞]]有直接的[[细胞毒]]（杀伤）作用。常用的栓测细胞毒效应的方法是51[[Cr]]-[[Na]]2Cro4盐水溶液与靶细胞胞混合，于37℃培养1小时左右，51Cr即可进入靶细胞，与[[胞浆]]蛋白结合，洗去游离的51Cr后，即可得到51Cr标记的靶细胞，将待检[[细胞毒性]]的细胞与51Cr标记的靶细胞混合（比例约为50：1或100：1）靶细胞被杀伤越多，释放到[[上清液]]中的液游离的51Cr越多，且不能被其他细胞吸收。用γ[[射线]]测量仪检测上清液中的cpm值，即可计算出待检细胞杀伤活性的高低。

细胞毒试验检测Tc细胞效应功能是否健全，及经IgG介导的ADCC效应，或NK细胞在[[抗肿瘤免疫]]中的作用是有意义的。

'''4．混合淋巴细胞的反应（MIR）''' 是体外研究T细胞的较好的方法，双向MLR常被用来筛选[[骨髓移植]]的[[供体]]。来自不同供体的淋巴细胞分别与病人的淋巴细胞[[混合培养]]4～5天，在最后8小时掺入51TdR掺入法测T细胞的反应性。或用细胞毒法观察受刺激的T细胞与活的靶细胞混合（靶细胞来自与刺激细胞相同的个体）如果T细胞受刺激后产生了细胞毒T细胞，可杀死活的细胞，根据靶细胞释放51Cr的多少算出T[[细胞移动]][[抑制因子]]）和LIF（[[白细胞移动抑制因子]]）来评估细胞免疫功能。近年来应用测定IL-2的[[免疫]]酶技术，操作简单，并能定量以取代了MIF和LIF的测定。单个核细胞与分裂原一起培养24小时，然后测定[[清液]]中的IL-2活性。在细胞免疫功能缺损时，特别是[[AIDS]]病人，IL-2分泌明显降低。而有些[[疾病]]，如[[多发性硬化]]、[[类风湿关节炎]]、[[移植排斥]]反应等病人体内血清中IL-2水平升高，表明病人T细胞活性增高。发生移植排斥反应的病人尿中IL-2也可升高。

也可用[[酶联免疫吸附试验]]测定各种体液中活化的T细胞脱落的IL-2受体（CD25），一般来说IL-2的水平和IL-2受体水平是平行的，IL-2和IL-2受体的检测可用于对某些疾病的监测，如移杆排斥、[[自身免疫病]]以及接受[[免疫抑制治疗]]的病人。

对体外培养的细胞进行细胞因子产生能力检测是检查[[细胞培养]]上清液中细胞因子的[[生物]]活性或[[抗原性]]。现已可用[[核酸]]杂交技术，即从组织中或细胞中提取RNA，与同位素或[[酶标记]]的该种细胞因子的cDNA[[探针]]作[[分子杂交]]试验，即印迹（dot blotting）或Northern印迹，若查出有某种因子的mRNA存在，即说明该细胞在所处培养条件下有产生某种细胞因子的能力。
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医学免疫学/细胞免疫功能的检测 - 版本历史

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