112.247.67.26：以“{{Hierarchy header}} 由于各种检测方法中所用的抗原性状不同，出现结果的现象也不同。最广泛应用方法有下述几种： === （...”为内容创建页面

2014-02-05T10:06:50Z

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由于各种检测方法中所用的[[抗原性]]状不同，出现结果的现象也不同。最广泛应用方法有下述几种：

=== （一）沉淀反应===

[[可溶性抗原]]与[[抗体]]结合，在两者比例合适时，可形成较大的不溶性[[免疫复合物]]。在反应体系中出现不透明的沉淀物，这种[[抗原抗体反应]]称为沉淀反应（precipitation neaction）。

1．环状沉淀试验先将含抗体的未稀释的[[免疫血清]]加到直径小于0.5cm的小试管底部。将稀释的含有可溶性抗原的材料重叠于上，让[[抗原]]与抗体在两液体的界面相遇，形成白色免疫复合物沉淀环，故名为环状沉淀试验（ring precipitationtest）,此法简便易行，需用材料较多是其缺点。

2．单向[[免疫扩散]]试验单向免疫扩散试验（single immunodiffusion）是在[[凝胶]]中进行的沉淀反应。将抗体混入加热溶解的[[琼脂]]中，倾注于玻片上，制成含有抗体的琼脂板，在适当位置打孔，将抗原材料加入琼脂板的小孔内，让抗原从小孔向四周的琼脂中扩散，与琼脂中的抗体相遇形成免疫复合物。当[[复合物]]体积增加到一定程度时停止扩散，出现以小孔为中心的圆形沉淀圈，沉淀圈的直径与加入的抗原浓度成正相关。本方法简便，易于观察结果，可测定抗原的灵敏度（最低浓度）约为10～20μg/ml，常用于定量测定人或动物[[血清]][[IgG]]、[[IgM]]、[[IgA]]和C3等，其缺点是需1～2天才能看结果（图20-1）

{{图片|guztzlvv.jpg|单向免疫扩散试验示意图}}

图20-1 单向免疫扩散试验示意图

3．[[免疫]]比浊法　当抗体浓度高，加入少量可溶性抗原，即可形成一些肉眼看不见的小免疫复合物，它可使通过液体的光束发生[[散射]]，随着加入抗原增多，形成的免疫复合物也增多，光散射现象也相应加强。免疫比浊法（immunonephelomytry）就是在一定的抗体浓度下，加入一定体积的样品，经过一段时间，用光散射[[浊度计]]（nephelometry）测量反应液体的[[浊度]]，来推算样品中的抗原含量。本法敏感、快速简便，可取代[[单向扩散]]法定量测定[[免疫球蛋白]]的浓度。

4，双向免疫扩散试验　双免疫扩散试验（double immunodiffusion）是在琼脂板上按一定距离打数个小孔，在相邻的两孔内分别放入抗原和抗体材料。当抗原和抗体向四周凝胶中扩散，在两孔间可出现2～3条沉淀线，本法常用于抗原或抗体的定性或定量检测，或用于两种抗原材料的抗原相关性分析（图20-2）。

{{图片|guztztjm.jpg|双向免疫扩散试验示意图}}

图20-2 双向免疫扩散试验示意图

5．[[对流免疫电泳]]　[[对流电泳]]（counterimmunoelectrophoresis）是一敏感快速的检测方法，即在电场作用下的双向免疫扩散。将琼脂板放入电泳槽内，使琼脂板的两孔沿着电场的方向，于负极侧的孔内加入抗原，于正极侧的孔内加入抗体，通电后，抗原带负电荷向正极泳动，抗体[[分子]]虽也带负电荷，但因[[分子量]]大，向正极的位移小，而受琼脂中电渗作用向负极移动，抗原和抗体能较快地集中在两孔之间的琼脂中形成免疫复合物的沉淀线。只需1小时左右即可观察结果。

6．[[免疫电泳]]　免疫电泳(immunoelectrophoresis)的方法分成两个步骤，即先进行电泳，再进行琼脂扩散。先将样品加入琼脂中电泳，将抗原各成分依电泳速度不同而分散开。然后在适当的位置上沿电泳方向挖一直线形槽，于槽内加入含有针对各种抗原混合抗体液，让各抗原成分与相应抗体进行双向免疫扩散，可形成多答卷沉淀线。常用此法进行血清的[[蛋白]]种类分析。对于免疫球蛋白缺损或增多的[[疾病]]的诊断或鉴别诊断有重要意义（图20-3）。

{{图片|guztzj61.jpg|免疫电泳法基本步示决图}}

{{图片|guztzr1u.jpg|免疫电泳法基本步示决图}}

{{图片|guztzw6m.jpg|免疫电泳法基本步示决图}}

{{图片|guztzymu.jpg|免疫电泳法基本步示决图}}

{{图片|guztz96i.jpg|免疫电泳法基本步示决图}}

图20-3 免疫电泳法基本步示决图

7．[[免疫印迹法]]免疫印迹法（immunoblotting）又称为Western[[印迹法]]，用于[[AIDS]]的[[血清抗体]]检测。第一步，为电泳分离[[HIV]]抗原，在电场中根据分子量大小不同[[病毒]]抗原各成分散开。第二步，将电泳分离的[[蛋白质]]转移到[[硝酸纤维膜]]上（电印迹），然后将印迹有病毒抗原的硝酸纤维膜浸湿于病人血清中。如果病人血清中含有与一种或几种抗原相对应的抗体的话，则在该抗原印迹部位形成免疫复合物沉淀。在洗去未沉淀的抗原和抗体后，在膜上加标记的抗[[人免疫球蛋白]]的抗体，此抗体可以和病毒抗原与人抗体形成的免疫复合物发生反应，最后加入显色[[底物]]（如果抗人Ig是用[[酶标记]]的）或做[[放射自显影]]（抗人Ig用125Ⅰ标记）以显示结果（图20-4）。

{{图片|guztze42.jpg|免疫印迹法检查患者血清中的HIV[[病毒抗体]]}}

{{图片|guztz6e1.jpg|免疫印迹法检查患者血清中的HIV病毒抗体}}

{{图片|guztzbnb.jpg|免疫印迹法检查患者血清中的HIV病毒抗体}}

{{图片|guztzgnx.jpg|免疫印迹法检查患者血清中的HIV病毒抗体}}

{{图片|guztzoi2.jpg|免疫印迹法检查患者血清中的HIV病毒抗体}}

图20-4 用免疫印迹法检查患者血清中的HIV病毒抗体

第一步：经电泳将HIV混合抗合抗原按分子量大小分离；

第二步：将已分离的抗原经电印迹转移到硝酸纤维膜上；

第三步：将待检病人血清加入覆盖于硝酸纤维膜上；

第四步：加入标记的第二抗体使之覆盖膜上；

第五步：加入显色底物（或放射自显影）显现第二抗体

=== （二）[[凝集反应]]===

[[细菌]]、[[红细胞]]或表面带有抗原的乳胶颗粒等都是不溶性的颗粒抗原，当与相应抗体结合，抗原与抗体结合形成[[凝集]]团块，即称为凝集反应（agglutination）。

1．直接凝集　直接凝集（directagglutination）是将细菌或红细胞与相应抗体结合产生的细菌凝集或[[红细胞凝集]]现象。可用于[[传染病]]诊断如[[肥达氏反应]]（Widal reaction）诊断[[伤寒病]]。或利用[[血细胞凝集]]现象检查[[血型]]。

2．间接凝集　间接凝集（indirectagglutination）是用可溶性抗原包被在乳胶颗粒或红细胞表面，与相应抗体混合出现的凝集现象。如用γ[[球蛋白]]包乳胶颗粒检测[[类风湿关节炎]]病人血清中的[[类风湿因子]]，用[[甲状腺球蛋白]]包被乳胶颗粒用于检测[[甲状腺]]球蛋的抗体。也可以将抗体吸附到乳胶颗粒上检查临床[[标本]]中的抗原，如细菌或[[真菌性脑膜炎]]抗体包被的乳颗粒，一旦与含有相应抗原的[[脑脊液]]混合，便可发生凝集，可进行快速诊断。故凝集反应即可测定抗原，也可测抗体，方法简便、敏感。

3．[[抗球蛋白试验]] 抗球蛋白试验（antiglobulintest,coombs test）的原理为间接凝集试验。例如应用于诊断[[自身免疫]][[溶血性贫血]]症时，Rh+红细胞与抗Rh血清间的反应。因抗Rh抗体是IgG只有两个结合价，分子较小（不如IgM结合价多，分子大）很难直接引起Rh+红细胞凝集。如果加入抗IgG的抗体，就可帮助抗Rh的IgG的抗体凝集红细胞。也就是经抗Ig的作用提高凝集反应的灵敏度。

=== （三）[[补体]]参与抗原抗体反应===

这一类反应主要包括[[溶血]]反应（hemolytic assay）、补体介导的[[细胞毒试验]]（complement mediated cytotoxicuty test）及[[补体结合试验]]（complement fixation test）。

1．溶血反应　抗体与红细胞[[表面抗原]]相遇，形成红细胞-抗体复合物即可使加入反应中的补体[[活化]]，导致红细胞溶解，此方法可用于红[[细胞]]的各种抗原或相应抗体的检测，此法比凝集反应敏感。溶血反应也是用于抗体[[分泌细胞]]即[[空斑形成细胞]]（PFC）检测的原理。

2．补体介导的细胞毒试验各种[[有核细胞]]与针对其表面抗原的抗体相遇，所形成的免疫复合物能活化反应中的补体，引起[[细胞膜]][[穿孔]]，在一定时间内，细胞仍能维持一定的形态不破碎，加入水溶性染如[[伊红]]Y（eosin Y）或[[台盼蓝]]（trypanblue）后，染料即可进入被活化补体穿孔的细胞，不带相应[[抗原细胞]]膜保持完整的活细胞不着色。此方法可用于带各种抗原的细胞的检测，如进行细胞MHC抗原的鉴定，和进行[[淋巴细胞]]中T细胞总数或其[[亚类]]的计数。在一些[[免疫学]]实验中也可用这种方法，根据需要特异地消除带某种抗原的细胞。

3．补体结合试验当抗原（可溶性或颗粒性）与相应抗体结合，由于浓度低不出现可见[[反应时]]，应用补体结合试验可检出此抗原抗体反应，它比凝集反应或沉淀反应灵敏度高。本法包括两个[[抗原抗体]]系统。一为检测系统由待检样品与已知抗原（或抗体）组成；另一为指示系统，由绵羊红细胞（SRBC）和抗SRBC组成。另加入作为补体的新鲜豚鼠血清。试验时[[试管]]中先加入检测系统和补体，混合经37℃30分钟使抗原、抗体、补体形成复合物，再加入指示系统，如出现溶血现象，说明检测系统中没有相对应的抗原抗体，补体是游离的指示系统的SRBC和抗体结合而出现溶血，即为反应阴性。如不出现溶血，表明检测系统中有[[抗原抗体复合物]]并结合补体，则指示系统无多余的补体作用而没有溶血现象，即为阳性。

在敏感的抗原、抗体检测方法（如酶标方法）出现之前补体结合试验曾广泛用于检测各种细菌、病毒或[[螺旋体]]（如[[梅毒]]）的抗原或抗体，由于本试验影响因素多，结果不稳定现已被新检测方法所代替。
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