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2014-01-26T14:24:00Z

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酶在正常和[[病理]][[代谢]]中起着重要作用，因此酶的测定是医学实验室的一项重要工作，在医学研究和[[医院]]常规工作中都要进行大量酶的测定。但要作好酶的测定不是一件很容易的事，因为它有很多与其它定量测定不同或独特之处，作好酶的测定除了必须掌握一般分析技术知识外，还须了解酶测定的特点、方法分类和各类方法的优缺点，然后根据各自实验室情况、研究目的和临床需要，才能设计和应用好各个具体的酶测定方法，创造性地作好酶的测定。

目前常用于酶定量测定的方法是测量酶的活性浓度，此方法并不直接测[[酶蛋白]]含量，实际上是测定酶[[催化]]反应的速度，并由此间接地推算出[[标本]]中酶浓度的高低，这是酶测定方法独特之处。

使用间接方法并不是因为该法比直接测定酶蛋白有很多优点，事实上间接方法有不少不足之处，在很大程度上采用间接法是出于无奈，因为在所测标本中酶蛋白浓度和其它[[蛋白]]相比明显偏低，例如在[[血清]]中大多数酶蛋白含量多在g/L水平，用一般化学方法从含量高达70g/L[[蛋白质]]的血清中将酶蛋白分离出来并直接测定其含量显然是很困难的。这样科学家才想到利用酶蛋白的催化特性来测定酶；微量酶蛋白可以明显加快所催化反应的速度，并在特定条件下，此反应速度（v）可和酶浓度（E）成正比例。可以下列二式表示之：

v＝△P/△t＝k.E

此式以单位时间（t）内产生物（P）生成量表示反应速度

v＝－△S/△t＝k.E

此式中以[[底物]]（S）减少量取代产物生成量。

以上二式是衡量测[[酶活性]]浓度方法是否准确可靠的基本标准。因为不是任何情况下酶的催化反应速度都能与酶浓度成正比例，当设计不当，所选择条件不合适时，反应速度v虽可能随酶浓度增加而加快，但不成正比例，即v≠k［E］，所得结果出现误差，从表17-1可以清楚看到此问题。

方法1所测反应速度（v）和酶浓度间存在一个明显正比例关系，各标本μg/L和酶浓度间高度的一致，相反方法2各标本的U/L不能准确反应酶浓度（μg/L）间的比例关系，浓度愈高误差愈大，例如标本5酶浓度为标本1的5倍。但其反应速度结果却显示为3.5倍，在临床工作中这种误差有可能给医师诊断[[疾病]]判断病情带来困难，在科研工作中也有可能导致不恰当的结论。方法3的结果说明在标本1到标本3的酶浓度之间，测定结果是准确的，但在高浓度标本时可能导致误差，这是在实际工作中常能遇到的情况。

表17-1　三个测同一酶方法结果的比较

{| class="wikitable"
| 标本
| rowspan="2" | 酶浓度（μg/L）
| colspan="3" | 测定结果（U/L）
|-
| 方法1
| 方法2
| 方法3
|
|-
| 1
| 1
| 100
| 50
| 10
|-
| 2
| 2
| 200
| 90
| 20
|-
| 3
| 3
| 300
| 125
| 30
|-
| 4
| 4
| 400
| 155
| 38
|-
| 5
| 5
| 500
| 175
| 45
|}

表17-1还显示了酶活性浓度测定的另一个重要特点，即测定结果U/L的相对性，不同于用质量单位mol/L表示浓度时高度一致性，如用不同方法测5份不同浓度[[血糖]]标本。其绝对值（μmol/L）不会有太大差异。但在酶活性浓度测定中往往不存在这样高的一致性。如表17-1三个法结果可在同一方法内进行比较。而绝不能在方法间进行比较，否则会得出荒谬的结论。这是因为这些方法测的是反应速度，只能用速度单位（一单位表示每一分钟有1μmol/L反应物的变化）来间接表示酶含量的高低，而速度快慢不仅受酶含量多少影响，还与其它很多因素有关，表17-1中法之所以有这样大的结果差异，很可能是由于三种方法使用了不同种类的底物，由于酶与不同底物亲和性不一样，反应速度的绝对值（μmol min<sup>-1</sup>）出现差异是不足为奇的。

这些叙述说明了在考虑或设计酶活性浓度测定方法时，重要的是要选择好各种条件，使在尽可能宽的范围内所测的反应速率v和酶浓度E之间存在着正比例关系。
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临床生物化学/血清酶定量的检测技术 - 版本历史

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